Матрикс протеин: купить протеин matrix 5.0 syntrax в спб

Содержание

Matrix 5.0 протеин, матрикс, производитель Syntrax, упаковка пакет, вес 2270 гр


Matrix 5.0 Syntrax 

Чтобы создать идеальную формулу протеиновой смеси Matrix 5.0, компании Syntrax понадобилось несколько лет. Первым делом ученые Syntrax полностью отказались от дешевых низкокачественных источников белка, отдав предпочтение только лучшим: ультрафильтрованному сывороточному протеину, ультрафильтрованному молочному протеину, неденатурированному яичному белку и глютаминовым пептидам. Эти источники белка не имеют себе равных в обеспечении прироста качественной мышечной массы и улучшении общего состояния организма.

Немаловажно, что Синтракс так же позаботилась и о вкусовых свойствах своего продукта. После долгих испытаний в лабораториях, протеин Matrix 5.0 приобрел превосходный шоколадный, ванильный, клубничный, банановый, печенье с кремом, мятное печенье , апельсин вкусы, которым редко обладают протеиновые смеси.


Порция Syntrax Matrix 5.0 это:

  • Всего лишь 120 килокалорий;
  • 23 грамма белка;
  • 2 грамма углеводов;
  • 0 грамм аспартама.

Сывороточный белок, мицеллярный казеин и яичный белок – отличные источники аминокислот, необходимых вашему организму. Каждый из них имеет свои специфические особенности. Из-за богатого аминокислотного состава и высокого содержания различных факторов роста и микроэлементов яичный белок часто называют «идеальным белком». Поэтому яичный белок — это самый дорогой вид белка. Сывороточный протеин является быстрейшим источником белка и обладает превосходными иммуностимулирующими способностями. Казеин – это самый медленный белок, он обеспечивает ваши мышцы аминокислотами в течение длительного времени и обладает самыми высокими антикатаболическими свойствами. Таким образом, первоклассная протеиновая смесь Матрикс 5.0 сводит к минимуму недостатки и подчеркивает сильные стороны каждого из этих видов белка.

Из-за совершенного сочетания разных протеинов Matrix 5.0 от Syntrax можно использовать как первоклассный источник белка в любое время суток. Кроме того, формула Матрикс хорошо сбалансирована и подходит как для людей, стремящихся набрать мышечную массу, так и для желающих избавиться от лишних килограммов. Протеиновая смесь Matrix 5.0 обеспечивает необходимое для поддержки правильного функционирования почек и иммунной системы количество антиоксидантов в организме.

Неоспоримый плюс: чтобы приготовить коктейль из Matrix 5.0, вам не нужен блендер – эта протеиновая добавка отлично размешивается в шейкере и даже ложкой в обычном стакане!

Благодаря вышеперечисленным преимуществам, протеиновая добавка Matrix 5.0 от компании Syntrax зарекомендовала себя на рынке спортивного питания как качественный и доступный продукт.

Состав:

Содержание питательных веществ на порцию продукта (32 грамм):

  • Калории — 120 ккал;
  • Калории от жиров — 15 ккал;
  • Всего жиров — 2 г;
  • Насыщенные жиры — 1 г;
  • Холестерин — 30 мг;
  • Всего углеводов — 3 г;
  • Протеин — 23 г;
  • Кальций — 160 мг;
  • Фосфор — 140 мг;
  • Магний — 20 мг;
  • Натрий — 105 мг;
  • Калий — 200 мг.

Аминокислотный состав на 100 г протеина:

  • Аргинин — 2,5 г;
  • Глютамин — 8,4 г;
  • Гистидин — 2,1 г;
  • Изолейцин — 5,8 г;
  • Лейцин — 10,3 г;
  • Лизин — 8,7 г;
  • Метионин — 2,2 г;
  • Фенилаланин — 3,6 г;
  • Треонин — 6,4 г;
  • Триптофан — 1,9 г;
  • Валин — 6,0 г.

Ингредиенты: ультрафильтрованный и неденатурированный концентрат сывороточного протеина, ультрафильтрованный и неденатурированный концентрат молочного протеина (включая мицеллярный казеин), неденатурированный яичный белок, гидролизованная пшеничная клейковина (включая глютаминовые пептиды), натуральные и искусственные ароматизаторы, лецитин, хлорид натрия, аспартам, ацесульфам калия.

Применение:

Растворите одну — две мерные ложки в 250-300 мл воды, нежирного молока. Принимайте Matrix 5.0 два — три раза в день, чтобы восполнить запасы протеина. Помните,что наилучшее время приема — с утра после пробуждения, после интенсивных тренировок и перед сном.

Противопоказания:

Индивидуальная непереносимость компонентов продукта.

Протеин Syntrax Matrix 5.0 — калорийность, полезные свойства, польза и вред, описание

Калории, ккал: 

393

Углеводы, г: 

9.5

Matrix 5.0 – популярная многосоставная протеиновая смесь от американской компании Syntrax. Упаковка продукта представляет собой ламинированный пакет на многоразовой гибкой молнии-застежке, позволяющей сохранить полезность смеси в течение всего периода употребления. В продаже доступен протеин со вкусом шоколада, ванили, а также мятного пряника, клубники и печенья «Арахисовое масло».

Калорийность протеина Syntrax Matrix 5.0

Калорийность протеина Syntrax Matrix 5.0 составляет 393 ккал на 100 грамм сухого продукта.

Состав протеина Syntrax Matrix 5.0

Для изготовления используются: ультрафильтрованный и неденатурированный концентрат сывороточного протеина, ультрафильтрованный и неденатурированный концентрат молочного протеина, включая мицеллярный казеин, неденатурированный яичный белок, гидролизованная пшеничная клейковина, натуральные и искусственные ароматизаторы, соевый лецитин, натрия хлорид, ацесульфам-К, сукралоза.

Продукт имеет насыщенный аминокислотный состав. Питательность одной порции (мерная ложка – около 30-32 грамм): калории – 120, белков – 23 г, жиров – 2 г, углеводов – 3 г, а также натрия – 150 мг и калия – 270 мг.

Упаковка содержит около 76 порций. Продукт не является лекарством.

Протеин Syntrax Matrix 5.0 в спорте

Поскольку продукт содержит три вида разных изолятов, он идеален для строительства сухой мышечной массы, уменьшения жировых отложений, обладает антиоксидантными свойствами и повышает иммунитет спортсмена (calorizator). Благодаря употреблению данного продукта обеспечивается положительный азотистый баланс и стабильный уровень инсулина в крови, что очень важно для процессов восстановления и роста мышц организма.

Способ приготовления протеина Syntrax Matrix 5.0

Для удобства измерений порций в упаковке имеется специальная мерная ложка (около 30-32 грамм смеси). На приготовление одного коктейля необходимо размешать в стакане воды или молока низкой жирности мерную ложку смеси. Важно понимать, что чем выше жирность молока, тем более калорийным получится коктейль (калоризатор). Принимать протеин можно до 2-3 раз в день: сразу после пробуждения, по окончании интенсивных тренировок и непосредственно перед сном, не забывая «вписывать» приём коктейля в свою суточную калорийность.

Противопоказания к применению протеина Syntrax Matrix 5.0

Индивидуальная непереносимость компонентов продукта, беременность и кормление грудью, лица младше 18 лет. Перед применением проконсультироваться с врачом.

Matrix 2.0 907 гр от Syntrax

Отличительные особенности Syntrax Matrix
Технологи компании Syntrax при создании протеинового комплекса Matrix® полностью отказались от таких дешевых источников белка как денатурированные казеинаты кальция и натрия.
В состав Matrix® входят только протеины высочайшего качества: ультрафильтрованный сывороточный протеин, ультрафильтрованный молочный протеин, натуральный яичный альбумин и пептиды глютамина. Они стоят намного дороже, но качество является залогом эффективности данного продукта.

Matrix® не только обладает превосходным вкусом, но и положительно влияет на состояние здоровья.
Все источники белка имеют по отдельности свои сильные и слабые стороны. Например, яичный протеин идеально усваивается и содержит большое количество факторов роста, но при этом очень недешев.  Сывороточный протеин быстрее всего усваивается и улучшает иммунитет. Казеин долго усваивается и поэтому способен подпитывать мышцы аминокислотами длительный промежуток времени.
Соответственно, хотя каждый из источников белка имеет много преимуществ, но их комплекс будет работать лучше, сочетая в себе все их плюсы и минимизируя недостатки.
Благодаря сочетанию высококачественных источников белка Matrix® обладает одним из лучших аминокислотных профилей на рынке спортивного питания. Он способствует увеличению мышечной массы и уменьшению жировой, обладает антиоксидантным действием, улучшает состояние иммунной системы, не оказывает негативного воздействия на почки и многое др.
Так как в  состав Matrix® входят протеины с различной скоростью усвоения, его можно принимать в любое время: как после тренировки, так и перед сном.
Несмотря на высочайшее качество стоимость Matrix® 5.0 относительно невелика, благодаря использованию экономичной ламинированной упаковки, которая позволяет сохранить все качества продукта, не увеличивая его цену.

Применение Matrix® 2.0:
Разведите 1 мерную ложку продукта (32 грамма) в 200-300 мл воды, обезжиренного молока или сока по вашему вкусу. Принимайте в течение дня между приемами пищи. Общее количество порций  зависит от массы тела, интенсивности  тренировок, общего потребления белковой пищи и калорийности рациона. Общее дневное потребление белка для ведущих активный образ жизни людей,  рекомендуется от 1,5-2 грамм на 1 кг массы тела.

Протеин Syntrax Matrix 5.0 (2270 грамм) \ вкусный коктейль

Протеин Matrix 5.0 Syntrax, купить который в Киеве по лучшей цене в Украине вы можете в магазине Mordex.Net, – это спортивная добавка, которая состоит из набора протеиновых молекул с разной продолжительностью воздействия на мышечные волокна. Препарат содержит белки, которое не проходили денатурацию (обработку). Протеиновые молекулы остались в натуральном состоянии: ультра-очищенная протеиновая сыворотка, ультра-очищенный молочный протеин, необработанный белок яйца и пептидные цепочки глютамина.

Протеин Matrix 5.0 Syntrax – это пищевая добавка, которую принимают в удобное время суток.

Купить комплексный протеиновый препарат Matrix 5.0 по низкой цене можно в магазине Mordex. Заказ оформляется на сайте в онлайн-режиме или по телефону. Оплаченный товар отправляют курьерской службой «от двери к двери» в Киеве и по всей Украине.

Отзывы про Matrix 5.0 протеин Syntrax в Украине

Syntrax Matrix 5.0 (2270 г) производится из натурального сырья. В его состав входят сразу три вида протеина: экстракты яичного и сывороточного белка и мицеллярный казеин. Такое сочетание отлично зарекомендовало себя на практике, поскольку каждый из компонентов усиливает действие и достоинства других ингредиентов. Спортивное питание Syntrax Matrix 5.0 (2270 г) оказывает активное воздействие на рост сухой мышечной ткани, особенно если спортсмен тренируется регулярно. Кроме этого, в состав комплекса введены глютаминовые пептиды, которые необходимы любому атлету для поддержания тонуса мышц.

Достоинства протеин комплекса Matrix 5.0 (2270 г)

В отличие от аналогичных протеиновых комплексов других производителей каждая порция коктейля содержит белки, которые обладают разной скоростью усвояемости, что позволяет спортсмену за единоразовый прием насытить организм аминокислотами на длительный промежуток времени. Такой уникальный состав добавки позволяет употреблять ее в утренние, вечерние часы и сразу после интенсивных занятий.

Сывороточный протеин обладает хорошей усвояемостью, что обеспечивает быстрое и легкое всасывание в пищеварительном тракте и попаданию в мышечные ткани. Яичный белок стимулирует рост мышц и является отличным источником протеина для организма атлета, но имеют высокую стоимость. Мицеллярный казеин усваивается постепенно, насыщая спортсмена редкими аминокислотами длительное время. Благодаря сочетанию разных видов протеина происходит насыщение организма необходимыми аминокислотами и белком в том объеме, который требуется для результативных тренировок и наращивания мускул.

В отличие от аналогов в состав Matrix 5.0 (2270 г) не входит мальтодекстрин, способствующий отложению жира, не содержит он и белки низкого качества. Конечно, цена порошковой смеси достаточно высока по сравнению с аналогичным спортивным питанием, но зато он обладает высокоэффективным стимулирующим воздействием на прирост мышечных тканей и имеет отменный вкус. К тому же смесь быстро и без образования комков смешивается с жидкостью даже без применения блендера.

В качестве упаковки производитель использует ламинированные мешки, которые также, как и пластиковые баночки отлично защищают продукт от влаги и кислорода, но стоят значительно дешевле.

По мнению экспертов, большинство профессионалов и даже новичков выбирают именно Matrix 5.0 (2270 г), предпочитая его аналогичным продуктам других изготовителей спортпита. Это обусловлено его высокими характеристиками, хорошей питательностью, укрепляющему воздействию и анаболическому действию. Это позволяет спортсмену существенно улучшать результативность тренировок при адекватной и обоснованной цене и отличному вкусу.

Купить в Киеве Матрикс 5 протеин (2270 г) можно в нашем магазине по приемлемым ценам и со своевременной доставкой по городам и регионам Украины.

Преимущества протеина Matrix 5.0 Syntrax

  • Стимулирует реставрацию мышечных клеток после тренинга.
  • Активизирует рост чистой массы мышц.
  • Поддерживает иммунитет и работу сердечно-сосудистой системы.
  • Стабилизирует обменные процессы в организме.
  • Укрепляет защитные функции организма.
  • Прием препарата в подходящем для спортсмена графике.

Состав комплекса Matrix 5.0 Syntrax

В одну дозу Matrix 5.0 Syntrax входит 23 гр. протеинового комплекса из молочного белка, мицеллярного казеина, протеиновой сыворотки, пептидных цепочек глютамина и яичного альбумина.

  • Протеиновая сыворотка быстро всасывается в организме и применима для эффективного закрытия «белкового окна» после тренинга.
  • Молочный протеин по свойствам идентичен сыворотке со средней скоростью поглощения.
  • Мицеллярный казеин с продолжительным действием, организм получает белковые молекулы на протяжении 5-7 часов. Питает мышцы аминокислотами в течение всего времени расщепления.
  • Яичный белок состоит из питательных микроэлементов и насыщен фактором роста.
  • Пептидные цепочки глютамина с оптимальной структурой аминокислотных соединений для тяжелоатлета.

Набор из разных видов протеиновых молекул увеличивает полезное воздействие каждого из них, нейтрализуя недостатки, которые проявляются при употреблении каждого протеина по отдельности: мицеллярный казеин не закрывает «белковое окно», а протеиновая сыворотка быстро используется мышцами.

Применение разнообразного комплекса протеиновых соединений полезно, так как каждый белок очень ценен для мышечной ткани. Белковые молекулы включают набор преимуществ и недостатков, их комплексное применение эффективнее, чем употребление по отдельности.

Протеиновый состав Matrix 5.0 Syntrax образует улучшенную матрицу, которая полезна для бодибилдера. После употребления препарата тяжелоатлет получает протеиновые молекулы с разной скоростью поглощения, что помогает питать мышечные волокна аминокислотными соединениями продолжительный период времени.

Дополнительные факты о протеине Matrix 5.0 Syntrax

  1. Низкая стоимость. За приемлемую цену спортсмен приобретает протеин высшего качества с приятными вкусовыми характеристиками. Производитель комплекса изготовил препарат в экономной упаковке. Matrix 5.0 Syntrax не разрекламирован, но продается по доступной цене.
  2. Способ употребления. Состав из комплекса протеина с быстрой, средней и медленной скоростью поглощения подходит для любого графика применения. Спортивную добавку используют как предтренник, белковый напиток на ночь или после тренировки.
  3. Аминокислотный набор. Разновидность белков доставляет в организм аминокислотные соединения с разной структурой. Matrix 5.0 Syntrax приближен к идеальному протеину, который стимулирует рост чистой массы мышц и ускоряет восстановление.

Состав Syntrax Matrix 5.0

 

Где купить протеин Matrix 5.0 Syntrax в Украине — цены в Киеве

Цена на спортивную добавку Matrix 5.0 Syntrax в магазине Mordex изменяется в зависимости от колебания курса валюты, веса упаковки (расфасовки).

Купить Matrix 5.0 Syntrax по лучшей цене можно в розничном магазине Mordex, который расположен по ул. Попудренко, 7а на втором этаже (ст. м. Дарница).

Заказать ☎ (093) 88-00-650

Протеин SynTrax Matrix (907-980 г)

Самые выгодные предложения по Протеин SynTrax Matrix (907-980 г)

 
 

Филипп, 25.06.2020

Достоинства: не приторный

Александр Бугаков, 23.05.2020

Достоинства: Хорошо растворяется и в воде и в молоке, приятный привкус который не надоедает (брал ментоловое печенье).

Недостатки: Редко бывает на складе

Комментарий: Хороший протеин за относительно невысокую цену, хотя так и не пойму почему альпийский крем почти в 2 раза дороже?

Михаил Г., 15.04.2020

Достоинства: Шоколадный с молоком заходит хорошо
результат вижу

Комментарий: Судя по отзывам у кого-то бывают проблемы с пищеварением- на себе не обнаружил.
Вкусы обсуждать смысла особого не вижу, кому что. Вкус не как у шоколадного коктейля конечно, я пью с молоком- мне нравится.
Размешивается с теплым молоком хорошо, с холодным чуть похуже.

Константин А., 18.02.2020

Достоинства: Довольно необычный и весьма приятный для стандартных протеиновых смесей вкус. Точнее — их много, на выбор, я лично предпочитаю Orange Cream. После взбивания в блендере получается такой сливочно-нежный коктейль, тягучий и сытный, пьётся легко и приятно, но это только если готовить шейк на молоке. Без молока консистенция и вкус гораздо проще и беднее, и пить его сложнее. Цена за 900-граммовую банку — одна из самых низких среди аналогичных многокомпонентных протеинов, что вероятно обуславливается не слишком раскрученным в России брендом и невнятным в процентном соотношении содержанием ингредиентов.

Недостатки: Несмотря на громкие заявления производителя сего продукта о том, что он «идеально и моментально размешивается», и «никаких больше блендеров, пачкающих кухню и отнимающих время» — это не более, чем фантазии маркетологов. Размешать эту смесь при помощи одной только ложки, или даже ручного шейкера с шариком-пружинкой или сеточкой — нереально. Рука устанет трясти, а в итоге на дне и стенках всё равно остаются плотные комочки — скорее всего как раз та самая «клейковина». С блендером получается гораздо проще и без комочков: минута — и густой сливочный коктейль готов!

Комментарий: Весьма странный состав. Нигде более мне не встречалась в составе протеина «гидролизованная пшеничная клейковина». Запах смеси в банке довольно резкий, не сказать что отвратительный, но и не слишком притягательный. По консистенции напоминает соевый протеин, плотный и влажный, не «пылит», из мерной ложки высыпается монолитным «куличиком».

Имя скрыто, 17.11.2019

Достоинства: хороший состав, быстро размешивается в шейкере.

Недостатки: мне не подошел вкус. вроде и шоколадный, и сладкий, а все равно могу его выпить только быстро, зажмурившись и подавляя рвотный рефлекс. Если бы растворяла в молоке, возможно было бы вкуснее.

Комментарий: очень понравился состав, поэтому буду пробовать другие вкусы этого протеина.

DiZic, 29.10.2019

Достоинства: Вкусный, хорошо растворяется, нормальный состав, доступная цена

Недостатки: не нашел

Комментарий: Мне очень нравится этот протеин, пробовал шоколад, клубнику, арахисовое печенье и печенье с кремом. Все вкусы понравились. Вкусы с печеньем содержат чуть больше углеводов и мелкие крошки печенья, не всем это понравится.

victor ryzaev, 12.08.2019

Достоинства: Делает свое дело — мышечная масса росла, как положено. Отличное сочетание цена-качество. С молоком получается приятная и вкусная консистенция. Со стулом проблем не возникает.

Недостатки: После него пил whey gold. Качество в последнем кажется чуть лучше.

Комментарий: У кого с деньгами все хорошо, я бы взял голд, а кто хочет получить тот же результат при меньших затратах, то берите matrix, не пожалеете.

Антон Г., 07.08.2019

Достоинства: Нету ((

Недостатки: Вкус брал шоколад,вообще ужасный ,и так же размешивается плохо , очень плохо.

Комментарий: Не советую к покупке.

Сергей, 02.07.2019

Достоинства: Хороший насыщенный вкус. Есть два мерных стаканчика на 30 грамм каждый (второй засыпан)

Недостатки: Нет недостатков.

Комментарий: Отличный протеин. Вкус насыщенный. Особенно хорошо сочетается с молоком. В тёплом молоке хорошо размешивается ложкой за 1 минуту.

Maria Molchanova, 26.06.2019

Комментарий: вкус молочного шоколада бомбический, растворяю в воде. очень довольна

 

Алёна О., 25.05.2019

Комментарий: Отличный протеин. Соответствует цена-качество! Углеводы не сахар

Елена М., 17.04.2019

Достоинства: Хорошо растворяется, вкусный(шоколад)

Недостатки: Не нашла

Борис А., 02.03.2019

Недостатки: Сладкий. Даже слишком. Клубничный категорически невкусный. Вкус быстро надоедает до тошноты. Смешивается плохо.

Комментарий: Вроде и рабочий, но за 10 тренировок так надоел, что начало тошнить от одного вида.

как принимать, состав и отзывы

Протеин Matrix 5.0 от Syntrax нужен для восполнения дефицита белка при занятиях спортом. С традиционным рационом сложно получить рекомендуемые для фитнеса 1,5-2 г белка на килограмм массы тела, поэтому используются порошковые добавки. «Матрикс» отличается ярким вкусом, содержит не только сывороточный, но и яичный белок, и продается по доступной цене. Это добавка нового поколения, легко растворимая без специального шейкера в воде, и удобная для повседневного употребления.

Состав Matrix 5.0 от Syntrax

Перед нами комплексная протеиновая добавка. Она состоит из:

  • Пептидных фракций;
  • Молочного и сывороточного белка;
  • Яичного альбумина;
  • Казеиновых белков

Время усвоения разных белков отличается, поэтому комплексные добавки более удобны для тех, кто хочет постоянно иметь некий запас аминокислот для восполнения белкового дефицита.

Пептидные фракции глютамина отличаются быстрым и легким усвоением, они хорошо работают, когда необходимо немедленно восполнить запас аминокислот.

Яичный альбумин считается самым полноценным белком, он усваивается чуть медленней, чем сыворотка, но содержит полный набор аминокислот.

Сывороточный протеин считается эталонным для приготовления спортивных добавок. Он полноценный по составу, и быстро усваивается. Качественная сыворотка не содержит жиров и сахара, и не является источником лактозы.

Молочный белок добавлен в формулу, чтобы немного замедлить усвоение. Самый «долгоиграющий» белок тут – казеин. Благодаря нему, порция «Матрикса» — это полноценный прием пищи.

Три преимущества «Матрикс»

Бюджетная стоимость. «Синтракс» экономит на пластиковых банках и этикетках. Протеин расфасован в пакеты с зиппером, мерная ложка прилагается. Это позволяет предлагать качественный белковый продукт по цене на 20% дешевле, чем у других производителей. Протеин Matrix 5.0 от Syntrax хорош для замены приемов пищи или дополнительного питания.

Возможность гибко варьировать время приема. Комплекс содержит белки с разной скоростью усвоения, потому можно пить этот протеин как утром, после пробуждения, так и вечером, перед сном, а также вместо перекуса, и после тренировки.

Полноценный состав включает в себя все аминокислоты, и всего 5 г углеводов из лактозы молочного протеина на 100 г порошка. Это ничтожное количество, им можно пренебречь, если речь не идет о соревновательной сушке.

Протеин отличается разнообразием вкусов. От классических «Ванили», «Клубники» и «Шоколада», до новых «Арахисовая паста», «Печенье», и «Фруктовый», эта добавка подойдет на все случаи жизни.

Как принимать Matrix 5.0 от Syntrax

Одна порция порошка содержит 32 г вещества. Нужно развести это в 200 мл воды или молока, либо сока, если нужны углеводы дополнительно. Коктейль принимают утром до завтрака, после тренировки и перед сном, это даст примерно 90 г белка в сутки. Такое количество позволит дополнить типичный рацион до 2 г белка на 1 кг массы тела. Есть ли смысл пить больше протеина? Один источники утверждают, что за раз усваивается только 30 г белка, другие не так радикальны в высказываниях, и считают, что усваивается все, вопрос только в скорости пищеварения.

Протеин не принимают «курсами» или периодами. Пока человек тренируется в зале, и ему требуется дополнительный белок, он может пить протеиновую добавку. Собственно, нет никакой проблемы с ее употреблением и теми, кто не тренируется в зале, но по какой-то причине не может получить весь необходимый белок из пищи.

Отзывы

Если судить по отзывам атлетов, это один из самых вкусных протеинов. Людям особенно нравится «молочный шоколад» и «мятное печенье». Эти два вкуса – в абсолютном «топе» фаворитов. Кто-то утверждает, что коктейль на воде не такой густой, как, например, у «Квест» или других американских марок, но это обусловлено отсутствием в составе гуаровой камеди в больших количествах. «Матрица» нравится людям за недорогую цену, хороший вкус, и богатый аминокислотный состав.

Отзывов о нарушении работы пищеварительной системы от этого протеина не замечено. Люди отмечают хороший вкус, и отсутствие проблем. Есть отдельная категория отзывов от выступающих спортсменов. Те, кто убирает протеин на подводке к сцене, не сталкиваются с какими-либо проблемами с «заливкой». Так или иначе, любой протеин содержит подсластители, которые задерживают воду. Это надо учитывать, если цель состоит в выступлении по бодибилдингу.

Помимо коктейлей, с Matrix 5.0 от Syntrax можно готовить запеканки, блины, печенье и даже протеиновые торты. Он может заменять муку в диетической выпечке, успешно смешивается с другими ингредиентами и придает блюдам приятный вкус.

Протеин Matrix 5.0 от Syntrax – выгодное решение как для профессиональных атлетов, так и для любителей фитнеса.

Сывороточный протеин SYNTRAX Matrix 5 lbs 2270 г, Мятное печенье

Проблема: стандартный протеин, который является низкокачественным, содержит вызывающий скопления жира мальтодекстрин, с ужасным вкусом, требующий блендер, чтобы размешаться полностью и содержащий всего один вид быстроусваиваемого протеина. Без сомнения, большинство из стандартных протеинов стоят дешево, но кто захочет давиться таким не удобным и не полезным протеином день ото дня?

Решение: Matrix! Проведя годы за созданием формулы Matrix, мы создали протеин, который решает все проблемы стандартных протеинов. Самое важное то, что мы полностью ушли от таких дешевых источников протеина, как денатурированные натрия и кальция казеинат. Мы знаем, чтобы быть лучше, мы должны использовать только высококачественные неденатурированные источники протеина, такие как ультрафильтрованный сывороточный протеин, ультрафильтрованный молочный протеин, неденатурированный яичный белок и глютаминовые пептиды. Стоимость намного выше, но результат оправдывает себя. Смесь этих протеинов имеет не только имеет великолепный вкус, но и недосягаемую полезность для здоровья и обменных процессов организма, особенно при строительстве новой мышечной массы.

Сделав абсолютно лучший протеин на рынке, мы знали, что должно сделать что-то еще. Мы решили, что мы не успокоимся пока не создадим абсолютно лучший вкус протеина на рынке. После многих проб, мы пришли к нескольким вкусам, которые буквально вызывают экстаз при употреблении.

Завершая решение проблемы, мы сделали так, чтобы Matrix полностью растворялся в вашем любимом напитке, не оставляя комочков. Больше никаких комочков или блендеров, которые только добавляют вам работы по мытью посуды. С Matrix вам нужна только ложка!

Факты:

1. Что такое Matrix ?

Matrix — это смесь высококачественного протеина.

2. Что делает Matrix отличным от конкурентов?

Любой другой экономичный протеин на рынке спортивного питания — это просто сывороточный протеин. Matrix подороже, но он содержит комбинацию из трех разных высококачественных протеинов, таких как сывороточный протеин, мицеллярный казеин и яичный протеин (белый яичный протеин).

3. Зачем нужна смесь различных видов протеина, вместо одного вида протеина?

На самом деле, существует несколько высококачественных источников протеина, такие как яйца, казеин и сыворотка, как всегда не один из них настолько хорош в одиночку. Все эти источники протеина воздействуют на организм и рост мышечной массы, но каждый из них имеет свои слабости и преимущества. Например, яичный протеин — это золотой стандарт источника белка. Он не только прекрасно поддерживает рост мышечной массы, но также содержит массу полезных веществ и микроэлементов. Обратная сторона яичного протеина — это его дороговизна. Изолят сывороточного протеина показал себя как самый быстроусваиваемый источник протеина и имеет превосходные качества по поддержанию имунной системы. Казеин показал себя как медленноусваиваемый источник протеина, который превосходно снабжает мышечную ткань аминокислотами, в течение долгого периода времени. Таким образом, даже не смотря на то, что употребление каждого их этих протеинов имеет свои преимущества, лучшим решение будет употребление одновременно нескольких высококачественных источников белка, чтобы уменьшить недостаки и увеличить пользу каждого источника протеина.

4. Когда лучшее время для использования Matrix?

Так как Matrix содержит оба источника белка и быстроусваиваемый и медленноусваиваемый, он является идеальным для использованию в любое время дня. Некоторые используют, как быстроусваиваемый сыворотный протеин, сразу после тренировки, а некоторые, как медленноусваиваемый казеиновый протеин, перед сном. Из-за того, что Matrix содержит медленный (казеиновый), средний (яичный) и быстрый (сывороточный) протеины, он идеален для любой ситуации. Он может быстро снабдить ваши мускулы необходимыми аминокислотами, так же хорошо, как и сделать запас полезных элементов для вашего тела на длительный период.

5. Состав аминокислот находящихся в Matrix лучший на рынке!

Более того, так как в нем содержатся три вида разных изолятов, он хорош для строительства сухой мышечной массы, уменьшения жировых отложений, имеет антиоксидантные свойства, повышает иммунитет организма и т.д.

Рекомендации по применению

Смешайте одну мерную ложку Matrix с 240 мл. воды или молока. Для тех, кто нуждается в пониженной порции протеина, половина одной мерной ложки смешайте с 120 мл. воды или молока. Когда вы мешаете с молоком вы добаляете больше калорий. Принимайте Matrix два-три раза в день, чтобы удовлетворить ваши потребности в протеине. Помните, что наилучшее время приема протеина — это с утра после подъема, после интенсивных физических нагрузок, таких как тренировки с весом и прямо перед сном. Мы гарантируем, что Matrix размешивается даже ложкой и имеет превосходный вкус. Не превышайте рекомендуемую дозировку. Продукт не должен использоваться, как замена полноценного питания. Прекратите прием продукта, если почувствуете отклонения от нормального состояния здоровья.

Состав

Состав в 30 г
Энергетическая ценность 140 ккал
в жирах 20 ккал
Жиры 2.5 г
насыщенные жиры 1 г
транс жиры 0 г
Холестерин 40 мг
Натрий 130 мг
Калий 210 мг
Углеводы 6 г
пищевые волокна 0 г
сахара 3 г
Белки 23 г
Важные аминокислоты на 100г белка
Аргинин 2.5 г
Глютамин 8.4 г
Гистидин 2.1 г
Изолейцин 5.8 г
Лейцин 10.3 г
Метионин 2.2 г
Фенилаланин З.б г
Треонин 6.4 г
Триптофан 1.9 г
Валин 6.0 г
Другие ингредиенты: протеиновая смесь из молока (ультрафильтрованный и неденатурированный концентрат сывороточного протеина (бренд ProminaTM), ультрафильтрованный и неденатурированный концентрат молочного протеина, включая мицеллярный казеин), протеиновая смесь (неденатурированный яичный белок, гидролизованная пшеничная клейковина (источник глютаминовых пептидов)), натуральные и искусственные ароматизаторы, соевый лецитин, соль, ацесульфам-К, сукралоза.

Viral Matrix Protein — обзор

5 Сборка вирусных матричных белков

Матричные белки вирусов РНК с отрицательной цепью первоначально синтезируются как растворимые белки в цитоплазме, которые затем разделяются на мембраны в различной степени, в зависимости от типа вируса. вирус и экспериментальные условия. Для большинства вирусов ассоциация с мембранами происходит независимо от других вирусных компонентов и, вероятно, включает взаимодействие с липидами мембран. Для некоторых вирусов, таких как VSV, вирус Эбола и вирус гриппа, было показано, что отрицательно заряженные фосфолипиды способствуют взаимодействию вирусного матричного белка с мембранами (Ruigrok, Barge, et al., 2000; Ruigrok, Schoehn и др., 2000; Заковски, Петри и Вагнер, 1981). Поскольку эти липиды обогащены на цитоплазматической поверхности плазматических мембран хозяина, это приводит к преимущественной локализации этих матричных белков на плазматической мембране.

Подобно вирусным белкам оболочки, вирусные матричные белки, вероятно, не распределены случайным образом в плазматической мембране хозяина, а вместо этого организованы в микродомены мембраны. В случае VSV и вируса гриппа микродомены, содержащие матриксный белок, в плазматических мембранах хозяина были продемонстрированы путем анализа кластеризации частиц иммунного золота на электронных микрофотографиях (Chen, Leser, Jackson, & Lamb, 2008; Swinteck & Lyles, 2008).В некоторых случаях, таких как вирус кори (Pohl, Duprex, Krohne, Rima, & Schneider-Schaulies, 2007) и вирус Эбола (Bavari et al., 2002; Panchal et al., 2003), белки вирусного матрикса присутствуют в моющем средстве. -резистентные липидные рафты при экспрессии в отсутствие других вирусных белков. Однако в других случаях, таких как вирус гриппа (Ali, Avalos, Ponimaskin, & Nayak, 2000), вирус Сендай (Ali & Nayak, 2000) и респираторно-синцитиальный вирус (Henderson, Murray, & Yeo, 2002), коэкспрессия Гликопротеины вирусной оболочки необходимы для того, чтобы белки вирусного матрикса присутствовали во фракциях мембран, устойчивых к детергентам, предположительно в тех же микродоменах, которые содержат гликопротеины оболочки.В самом деле, совместная локализация белка M1 вируса гриппа в микродоменах плазматической мембраны хозяина, содержащих HA, была продемонстрирована анализом иммуноэлектронных микрофотографий (Chen et al., 2008). Однако аналогичный анализ VSV-инфицированных клеток показал, что M-белок и G-белок находятся в отдельных мембранных микродоменах, и единственное место, где они колокализовались, было на сайтах почкования вируса (Swinteck & Lyles, 2008). Точно так же матричный (Z) белок аренавируса Junin не колокализуется с GPC-содержащими микродоменами (Agnihothram et al., 2009). Как и в случае образования вирусного псевдотипа, присутствие вирусных белков в отдельных мембранных микродоменах, которые собираются вместе в сайтах почкования вируса, подразумевает своего рода движущую силу для кластеризации или слияния этих мембранных микродоменов.

Большинство учебных моделей сборки вирусов постулируют прямое взаимодействие между вирусными матриксными белками и цитоплазматическими доменами гликопротеинов вирусной оболочки как движущую силу сборки вируса. Однако биохимически продемонстрировать такое прямое взаимодействие было очень сложно.Например, большинство гликопротеинов оболочки легко солюбилизируются из вирионов, свободных от матричных белков, даже с помощью самых мягких моющих средств, что исключает использование типичных подходов иммунопреципитации или аффинного осаждения («выпадающего»). Таким образом, если такое взаимодействие существует, скорее всего, оно будет иметь низкое сродство. В экспериментах в нашей лаборатории (Lyles, McKenzie & Parce, 1992) было показано, что M-белок и G-белок, очищенные от VSV в присутствии детергента, взаимодействуют друг с другом с умеренным сродством ( K d ∼ 20 нМ ) и относительно быстрая скорость уравновешивания ( т 1/2 ∼ 5–10 мин).Это взаимодействие проявлялось в стабилизации тримеров G-белка в присутствии M-белка, что было проанализировано с помощью флуоресцентной спектроскопии. Однако нельзя было окончательно продемонстрировать, что стабилизация тримеров G-белка происходила из-за взаимодействия M-белка с цитоплазматическим доменом G-белка или, альтернативно, с мицеллами детергента, связанными с трансмембранным доменом. Имеются сообщения о взаимодействии белков вирусного матрикса с гликопротеинами оболочки в клеточных лизатах с использованием коиммунопреципитации или аналогичных подходов (например,г., Capul, de la Torre, & Buchmeier, 2011; Капул и др., 2007; Пантуа, МакГиннес, Пиплз и Моррисон, 2006 г.). Однако эти результаты могут быть связаны с большими поливалентными комплексами, которые также могут содержать другие белки.

Matrix Protein — обзор

5 Сборка вирусных матричных белков

Матричные белки вирусов РНК с отрицательной цепью первоначально синтезируются как растворимые белки в цитоплазме, которые затем разделяются на мембраны в различной степени, в зависимости от типа вируса. вирус и экспериментальные условия.Для большинства вирусов ассоциация с мембранами происходит независимо от других вирусных компонентов и, вероятно, включает взаимодействие с липидами мембран. Для некоторых вирусов, таких как VSV, вирус Эбола и вирус гриппа, было показано, что отрицательно заряженные фосфолипиды способствуют взаимодействию вирусного матричного белка с мембранами (Ruigrok, Barge, et al., 2000; Ruigrok, Schoehn, et al., 2000; Заковски, Петри и Вагнер, 1981). Поскольку эти липиды обогащены на цитоплазматической поверхности плазматических мембран хозяина, это приводит к преимущественной локализации этих матричных белков на плазматической мембране.

Подобно вирусным белкам оболочки, вирусные матричные белки, вероятно, не распределены случайным образом в плазматической мембране хозяина, а вместо этого организованы в микродомены мембраны. В случае VSV и вируса гриппа микродомены, содержащие матриксный белок, в плазматических мембранах хозяина были продемонстрированы путем анализа кластеризации частиц иммунного золота на электронных микрофотографиях (Chen, Leser, Jackson, & Lamb, 2008; Swinteck & Lyles, 2008). В некоторых случаях, например, вирусом кори (Pohl, Duprex, Krohne, Rima, & Schneider-Schaulies, 2007) и вирусом Эбола (Bavari et al., 2002; Panchal et al., 2003), вирусные матричные белки присутствуют в устойчивых к детергентам липидных рафтах при экспрессии в отсутствие других вирусных белков. Однако в других случаях, таких как вирус гриппа (Ali, Avalos, Ponimaskin, & Nayak, 2000), вирус Сендай (Ali & Nayak, 2000) и респираторно-синцитиальный вирус (Henderson, Murray, & Yeo, 2002), коэкспрессия Гликопротеины вирусной оболочки необходимы для того, чтобы белки вирусного матрикса присутствовали во фракциях мембран, устойчивых к детергентам, предположительно в тех же микродоменах, которые содержат гликопротеины оболочки.В самом деле, совместная локализация белка M1 вируса гриппа в микродоменах плазматической мембраны хозяина, содержащих HA, была продемонстрирована анализом иммуноэлектронных микрофотографий (Chen et al., 2008). Однако аналогичный анализ VSV-инфицированных клеток показал, что M-белок и G-белок находятся в отдельных мембранных микродоменах, и единственное место, где они колокализовались, было на сайтах почкования вируса (Swinteck & Lyles, 2008). Точно так же матричный (Z) белок аренавируса Junin не колокализуется с GPC-содержащими микродоменами (Agnihothram et al., 2009). Как и в случае образования вирусного псевдотипа, присутствие вирусных белков в отдельных мембранных микродоменах, которые собираются вместе в сайтах почкования вируса, подразумевает своего рода движущую силу для кластеризации или слияния этих мембранных микродоменов.

Большинство учебных моделей сборки вирусов постулируют прямое взаимодействие между вирусными матриксными белками и цитоплазматическими доменами гликопротеинов вирусной оболочки как движущую силу сборки вируса. Однако биохимически продемонстрировать такое прямое взаимодействие было очень сложно.Например, большинство гликопротеинов оболочки легко солюбилизируются из вирионов, свободных от матричных белков, даже с помощью самых мягких моющих средств, что исключает использование типичных подходов иммунопреципитации или аффинного осаждения («выпадающего»). Таким образом, если такое взаимодействие существует, скорее всего, оно будет иметь низкое сродство. В экспериментах в нашей лаборатории (Lyles, McKenzie & Parce, 1992) было показано, что M-белок и G-белок, очищенные от VSV в присутствии детергента, взаимодействуют друг с другом с умеренным сродством ( K d ∼ 20 нМ ) и относительно быстрая скорость уравновешивания ( т 1/2 ∼ 5–10 мин).Это взаимодействие проявлялось в стабилизации тримеров G-белка в присутствии M-белка, что было проанализировано с помощью флуоресцентной спектроскопии. Однако нельзя было окончательно продемонстрировать, что стабилизация тримеров G-белка происходила из-за взаимодействия M-белка с цитоплазматическим доменом G-белка или, альтернативно, с мицеллами детергента, связанными с трансмембранным доменом. Имеются сообщения о взаимодействии белков вирусного матрикса с гликопротеинами оболочки в клеточных лизатах с использованием коиммунопреципитации или аналогичных подходов (например,г., Capul, de la Torre, & Buchmeier, 2011; Капул и др., 2007; Пантуа, МакГиннес, Пиплз и Моррисон, 2006 г.). Однако эти результаты могут быть связаны с большими поливалентными комплексами, которые также могут содержать другие белки.

Matrix Protein — обзор

14.5.3.1.3 Домен, подобный эпидермальному фактору роста

EGF-LD находятся в большом количестве белков, в основном животного происхождения (факторы роста, рецепторы липопротеинов, селектины, факторы свертывания крови, Белки ЕСМ и др.) и часто встречаются в тандемных повторах с разной степенью сохранности. Функциональное значение этих доменов еще не изучено. Общей чертой этих повторяющихся доменов является то, что они обнаруживаются во внеклеточной части белков TM или в секретируемых белках, участвующих во взаимодействии белков (Appella et al., 1988; Davis, 1990). Домены EGF обычно содержат шесть остатков цистеина, которые образуют дисульфидные мостики. Длина субдоменов между цистеинами сильно различается. Некоторые EGF-LD обладают способностью связывать кальций и поэтому называются кальций-связывающим EGF (cbEGF).Домены cbEGF образуют более жесткую, устойчивую к протеазе структуру при связывании кальция, как показано для белка EtMIC4 Eimeria (Periz et al., 2005), белка TM, содержащего 31 EGF-подобный и 12 TSR доменов (Tomley et al., 2001). Это свойство может помочь сформировать удлиненную структуру, подобную стеблю, чтобы максимально выдвигать cbEGF-содержащие белки с поверхности клетки.

EGF-LD обнаружены в МПК апикомплексана и на резидентных поверхностных белках Plasmodium . Пять EGF-содержащих белков в T.gondii являются TM (MIC6, 7, 8, 9 и 12) (Reiss et al., 2001; Meissner et al., 2002; Opitz et al., 2002), а два являются растворимыми (MIC3 и TgSPATR) (Garcia-Reguet et al., 2000; Kawase et al., 2010). MIC3, 6, 8 и TgSPATR экспрессируются тахизоитами и брадизоитами (Garcia-Reguet et al., 2000; Meissner et al., 2002), тогда как MIC7 и MIC9 преимущественно экспрессируются брадизоитами (Meissner et al., 2002). Ортолог EtMIC4 Toxoplasma существует в базе данных ToxoDB. Этот белок, вероятно, соответствует т.gondii MIC12, поскольку выведенная аминокислотная последовательность практически идентична частичной последовательности MIC12, опубликованной Opitz et al. (2002). По крайней мере, два из EGF-содержащих МПК способствуют инвазии тахизоитных клеток. Паразиты MIC6 KO обнаруживают неправильную локализацию связывающих углеводы адгезинов MIC1 и MIC4, что приводит к потере ~ 50% инвазивных клеток (Sawmynaden et al., 2008). Условное удаление MIC8 выявило важную роль в инвазии, характеризующейся блоком секреции ретри, но нормальной подвижностью скольжения и апикальным прикреплением (Kessler et al., 2008), подтверждают потенциальную роль MIC8 в передаче сигналов о выделении rhoptries для инвазии паразитов (see next).

EGF-домены белков MIC играют несколько неадгезивных ролей в своих родственных белках. Функция доменов EGF в сборке белковых комплексов MIC была выявлена ​​после того, как было показано, что второй и третий домены EGF MIC6 ассоциируют с MIC1 galectin-LD (GLD) (Sawmynaden et al., 2008). Эта ассоциация является фундаментальной для сборки комплекса MIC6 / MIC1 / MIC4. Структура интерфейса MIC6 – EGF2 / MIC1 – GLD выявила новый способ взаимодействия для домена EGF с участием интимной гидрофобной поверхности.Многокопийная сборка этого комплекса, поддерживаемая взаимодействием MIC6-EGF / MIC1-GLD, была предложена для усиления мультивалентного воздействия MIC1 на поверхность паразита во время инвазии (Reiss et al., 2001).

Вторая роль доменов MIC-EGF в активации передачи сигналов хозяина была выявлена ​​с использованием рекомбинантных белков и KO паразитов (Muniz-Feliciano et al., 2013). Эта работа показала, что паразиты WT, но не те, у которых отсутствуют MIC3 или MIC6, активируют рецептор EGF / PI3P / Akt-сигнальный путь, который подавляет опосредованное аутофагией уничтожение паразита в клетках человека.Рекомбинантной MIC3 или MIC6, но не M2AP или MIC4 было достаточно для активации сигнального пути и повышения выживаемости паразитов. Эти данные предполагают роль белков MIC EGF в уклонении от иммунной защиты хозяина.

В качестве возможной третьей роли для MIC EGFs, двухгибридные эксперименты на дрожжах выявили взаимодействия доменов MIC3 EGF с двумя белками человека, а именно, белком 3, связанным со сперматогенезом (Spata3), и белком 2, связанным с Dickkopf (Dkk2) (Wang et al. др., 2015). Spata3 — это специфический для семенников белок с неизвестной функцией, тогда как Dkk2 является более широко экспрессируемым секреторным белком, который противодействует передаче сигналов Wnt.Биологическое значение взаимодействия MIC3 со Spata3 и Dkk2 требует дальнейшего изучения. Наконец, MIC3 был задействован как активатор продукции TNF-альфа спеноцитами мышей и перитонеальными макрофагами (Qiu et al., 2016), хотя еще предстоит определить, зависит ли эта активность от его доменов EGF.

Нативная структура собранного матричного белка 1 вируса гриппа A

  • 1.

    Россман, Дж. С. и Лэмб, Р. А. Сборка и почкование вируса гриппа. Вирусология 411 , 229–236 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 2.

    Elster, C., Larsen, K., Gagnon, J., Ruigrok, R. W. & Baudin, F. Белок M1 вируса гриппа связывается с РНК через сигнал ядерной локализации. Дж. Ген. Вирол . 78 , 1589–1596 (1997).

    CAS PubMed Google ученый

  • 3.

    Noton, S. L. et al. Идентификация доменов матричного белка M1 вируса гриппа A, необходимых для связывания NP, олигомеризации и включения в вирионы. Дж. Ген. Вирол . 88 , 2280–2290 (2007).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 4.

    Chen, B.J., Takeda, M. & Lamb, R.A. Гемагглютинин вируса гриппа (подтип h4) требует пальмитоилирования его цитоплазматического хвоста для сборки: белки M1 двух подтипов различаются по своей способности поддерживать сборку. Дж. Вирол . 79 , 13673–13684 (2005).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 5.

    Zhang, J., Pekosz, A. & Lamb, R.A. Сборка вируса гриппа и микродомены липидного рафта: роль цитоплазматических хвостов гликопротеинов шипа. Дж. Вирол . 74 , 4634–4644 (2000).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 6.

    Чу, К. М., Доусон, И. М. и Элфорд, В. Дж. Нитчатые формы, связанные с недавно выделенным вирусом гриппа. Ланцет 253 , 602 (1949).

    Google ученый

  • 7.

    Мосли В. М. и Вайкофф Р. В. Г. Электронная микрография вируса гриппа. Природа 157 , 263 (1946).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • 8.

    Ригли, Н. Г. Электронная микроскопия вируса гриппа. руб. Med. Бык . 35 , 35–38 (1979).

    CAS PubMed Google ученый

  • 9.

    Ruigrok, R. W., Calder, L. J. & Wharton, S. A. Электронная микроскопия субмембранной структуры вируса гриппа. Вирусология 173 , 311–316 (1989).

    CAS PubMed Google ученый

  • 10.

    Nermut, M. V. Дальнейшие исследования тонкой структуры вируса гриппа. Дж. Ген. Вирол . 17 , 317–331 (1972).

    CAS PubMed Google ученый

  • 11.

    Fontana, J. & Steven, A.C. При низком pH матричный белок M1 вируса гриппа претерпевает конформационные изменения перед диссоциацией от мембраны. Дж. Вирол . 87 , 5621–5628 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 12.

    Sha, B. & Luo, M. Структура бифункционального мембранно-связывающего РНК белка, матричного белка M1 вируса гриппа. Nat. Struct. Биол . 4 , 239–244 (1997).

    CAS PubMed Google ученый

  • 13.

    Arzt, S. et al. Объединенные результаты исследований раствора интактного белка M1 вируса гриппа и новой кристаллической формы его N-концевого домена показывают, что M1 представляет собой удлиненный мономер. Вирусология 279 , 439–446 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 14.

    Harris, A., Forouhar, F., Qiu, S., Sha, B. & Luo, M. Кристаллическая структура белка матрикса гриппа M1 при нейтральном pH: границы раздела белков M1 – M1 могут вращаться в олигомерных структурах M1. Вирусология 289 , 34–44 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 15.

    Zhang, W.и другие. Кристаллическая структура матричного белка ортомиксовируса раскрывает механизмы самополимеризации и мембранной ассоциации. Proc. Natl Acad. Sci. США 114 , 8550–8555 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 16.

    Sugita, Y., Noda, T., Sagara, H. & Kawaoka, Y. Ультрацентрифугирование деформирует нефиксированные вирионы гриппа А. Дж. Ген. Вирол . 92 , 2485–2493 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 17.

    Vijayakrishnan, S. et al. Криотомография зарождающегося вируса гриппа A выявляет нити различной морфологии, которые в большинстве случаев не имеют генома на своем дистальном конце. PLoS Патог . 9 , e1003413 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 18.

    Кальдер, Л. Дж., Василевски, С., Берриман, Дж. А. и Розенталь, П. Б. Структурная организация вируса нитчатого гриппа А. Proc. Natl Acad. Sci. США 107 , 10685–10690 (2010).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • 19.

    Chlanda, P. et al. Структурный анализ роли белков, ассоциированных с мембраной вируса гриппа А, в сборке и морфологии. Дж. Вирол . 89 , 8957–8966 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 20.

    Ruigrok, R. W. H. et al. Мембранное взаимодействие белка M1 вируса гриппа. Вирусология 267 , 289–298 (2000).

    CAS PubMed Google ученый

  • 21.

    Бурмакина С. В. и Гарсия-Састре А. Исследования обратной генетики нитчатой ​​морфологии вируса гриппа А. Дж. Ген. Вирол . 84 , 517–527 (2003).

    CAS PubMed Google ученый

  • 22.

    Elleman, C.J. и Barclay, W. S. Матричный белок M1 контролирует нитчатый фенотип вируса гриппа А. Вирусология 321 , 144–153 (2004).

    CAS PubMed Google ученый

  • 23.

    Burleigh, L.M., Calder, L.J., Skehel, J. J. & Steinhauer, D. A. Вирусы гриппа A с мутациями в шестом домене спирали M1 демонстрируют широкий спектр морфологических фенотипов. Дж. Вирол . 79 , 1262–1270 (2005).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 24.

    Шишков А. и др. Особенности пространственной структуры матричного белка M1 вируса гриппа А в кислом растворе, имитирующем внутреннюю лизосомную среду. FEBS J . 278 , 4905–4916 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 25.

    Chiang, M.-J. и другие. Поддержание pH-зависимой конформационной гибкости M1 имеет решающее значение для эффективной репликации вируса гриппа А. Emerg. Микробы заражают . 6 , e108 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 26.

    Dahmani, I., Ludwig, K. & Chiantia, S. Матричный белок M1 гриппа A вызывает деформацию липидной мембраны посредством мультимеризации белков. Biosci. Репутация . 39 , BSR201 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 27.

    Zhang, X. et al. Атомная модель вируса без оболочки показывает датчики pH для скоординированного процесса проникновения в клетки. Nat. Struct. Мол. Биол . 23 , 74–80 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 28.

    Li, Z. & Blissard, G.W. Autographa californica белок GP64 множественного нуклеополиэдровируса: роль остатков гистидина в запуске слияния мембран и расширения пор слияния. Дж. Вирол . 85 , 12492–12504 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 29.

    Колдер, Л. Дж. И Розенталь, П. Б. Криомикроскопия позволяет получить структурные снимки слияния мембран вируса гриппа. Nat. Struct.Мол. Биол . 23 , 853–858 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 30.

    Gui, L., Ebner, J. L., Mileant, A., Williams, J. A. & Lee, K. K. Визуализация и секвенирование ремоделирования мембраны, приводящего к слиянию вируса гриппа. Дж. Вирол . 90 , 6948–6962 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 31.

    Мартинес-Собридо, Л. и Гарсия-Састре, А. Создание рекомбинантного вируса гриппа из плазмидной ДНК. J. Vis. Опыт . 42 , 2057 (2010).

    Google ученый

  • 32.

    Tobita, K., Sugiura, A., Enomote, C. & Furuyama, M. Анализ зубного налета и первичное выделение вирусов гриппа A в установленной линии клеток почек собак (MDCK) в присутствии трипсина . Med. Microbiol. Иммунол. (Berl.) 162 , 9–14 (1975).

    CAS Google ученый

  • 33.

    Wan, W. et al. Структура и сборка нуклеокапсида вируса Эбола. Nature 551 , 394–397 (2017).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 34.

    Hagen, W. J. H., Wan, W. & Briggs, J. A. G. Реализация схемы наклона криоэлектронной томографии, оптимизированной для усреднения субтомограмм высокого разрешения. J. Struct. Биол . 197 , 191–198 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 35.

    Мастронард, Д. Н. Автоматизированная электронно-микроскопическая томография с надежным прогнозированием движений образца. J. Struct. Биол . 152 , 36–51 (2005).

    PubMed Google ученый

  • 36.

    Кремер, Дж. Р., Мастронарде, Д.Н. и Макинтош, Дж. Р. Компьютерная визуализация данных трехмерного изображения с использованием IMOD. J. Struct. Биол . 116 , 71–76 (1996).

    CAS PubMed Google ученый

  • 37.

    Роху, А. и Григорьев, Н. CTFFIND4: быстрая и точная оценка расфокусировки по электронным микрофотографиям. J. Struct. Биол . 192 , 216–221 (2015).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 38.

    Grant, T. и Grigorieff, N. Измерение оптимальной экспозиции для крио-ЭМ одиночных частиц с использованием реконструкции ротавируса VP6 на 2,6 Å. eLife 4 , e06980 (2015).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 39.

    Turoňová, B., Schur, F. K. M., Wan, W. & Briggs, J. A. G. Эффективная коррекция 3D-CTF для криоэлектронной томографии с использованием NovaCTF улучшает разрешение усреднения субтомограмм до 3.4Å. J. Struct. Биол . 199 , 187–195 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 40.

    Pettersen, E. F. et al. UCSF Chimera — система визуализации для поисковых исследований и анализа. J. Comput. Chem . 25 , 1605–1612 (2004).

    CAS Google ученый

  • 41.

    Förster, F., Medalia, O., Zauberman, N., Baumeister, W. & Fass, D. Структура комплекса белков оболочки ретровируса in situ изучается с помощью криоэлектронной томографии. Proc. Natl Acad. Sci. США 102 , 4729–4734 (2005).

    ADS PubMed Google ученый

  • 42.

    Nickell, S. et al. Программный инструментарий TOM: сбор и анализ для электронной томографии. J. Struct. Биол . 149 , 227–234 (2005).

    PubMed Google ученый

  • 43.

    Castaño-Díez, D., Kudryashev, M., Arheit, M. & Stahlberg, H. Dynamo: гибкий, удобный инструмент разработки для усреднения субтомограмм крио-ЭМ данных в высокопроизводительных вычислительных средах. J. Struct. Биол . 178 , 139–151 (2012).

    PubMed Google ученый

  • 44.

    Ковтун О. и др. Структура ретромерного покрытия, собранного с мембраной, определена методом криоэлектронной томографии. Nature 561 , 561–564 (2018).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 45.

    Tan, Y.Z. et al. Решение проблемы предпочтительной ориентации образца в одночастичной крио-ЭМ посредством наклона. Nat. Методы 14 , 793–796 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 46.

    Розенталь, П. Б. и Хендерсон, Р. Оптимальное определение ориентации частиц, абсолютной руки и потери контраста в одночастичной электронной криомикроскопии. J. Mol. Биол . 333 , 721–745 (2003).

    CAS Google ученый

  • 47.

    Первушин, К. Влияние спектроскопии, оптимизированной для поперечной релаксации (TROSY), на ЯМР как метод структурной биологии. В. Rev. Biophys . 33 , 161–197 (2000).

    CAS PubMed Google ученый

  • 48.

    Delaglio, F. et al. NMRPipe: система многомерной спектральной обработки, основанная на конвейерах UNIX. J. Biomol. ЯМР 6 , 277–293 (1995).

    CAS PubMed Google ученый

  • 49.

    Mayzel, M., Rosenlöw, J., Isaksson, L. & Orekhov, V.Y. Многомерный ЯМР с временным разрешением и неоднородной выборкой. J. Biomol. ЯМР 58 , 129–139 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 50.

    Vranken, W.F. et al. Модель данных CCPN для ЯМР-спектроскопии: разработка программного обеспечения. Белки 59 , 687–696 (2005).

    CAS PubMed Google ученый

  • 51.

    Schwarzinger, S. et al. Последовательно-зависимая коррекция химических сдвигов ЯМР случайных катушек. J. Am. Chem. Soc . 123 , 2970–2978 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 52.

    Ферраж, Ф., Зооненс, М., Варшавски, Д. Э., Попот, Ж.-Л. И Боденхаузен, Г. Медленная диффузия макромолекулярных сборок с помощью нового метода ЯМР с градиентом импульсного поля. J. Am. Chem. Soc . 125 , 2541–2545 (2003).

    CAS PubMed Google ученый

  • 53.

    Гарсиа де ла Торре, Дж., Уэртас, М. Л. и Карраско, Б. Расчет гидродинамических свойств глобулярных белков по их структуре на атомном уровне. Biophys. J . 78 , 719–730 (2000).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 54.

    Zheng, S.Q. et al. MotionCor2: анизотропная коррекция движения, вызванного лучом, для улучшенной криоэлектронной микроскопии. Nat. Методы 14 , 331–332 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 55.

    Живанов Ю.и другие. Новые инструменты для автоматизированного определения криоЭМ структуры высокого разрешения в РЕЛИОН-3. eLife 7 , e42166 (2018).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 56.

    Desfosses, A., Ciuffa, R., Gutsche, I. & Sachse, C. SPRING — пакет обработки изображений для спиральной реконструкции на основе одной частицы из электронных криомикрофотографий. J. Struct. Биол . 185 , 15–26 (2014).

    CAS PubMed Google ученый

  • 57.

    Zivanov, J., Nakane, T. & Scheres, S.H. W. Байесовский подход к коррекции движения, индуцированного лучом, в крио-ЭМ анализе одиночных частиц. IUCrJ 6 , 5–17 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 58.

    He, S. & Scheres, S. H. W. Спиральная реконструкция в RELION. J. Struct. Биол . 198 , 163–176 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 59.

    Эмсли П., Локамп Б., Скотт В. Г. и Коутан К. Особенности и развитие Coot. Acta Crystallogr. Д 66 , 486–501 (2010).

    CAS Google ученый

  • 60.

    Kidmose, R. T. et al. Намдинатор — автоматическая молекулярная динамика, гибкая подгонка структурных моделей к крио-ЭМ и кристаллографическим экспериментальным картам. IUCrJ 6 , 526–531 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 61.

    Afonine, P. V. et al. Уточнение в реальном пространстве в PHENIX для крио-ЭМ и кристаллографии. Acta Crystallogr. Д 74 , 531–544 (2018).

    CAS Google ученый

  • 62.

    Barad, B.A. et al. EMRinger: модель с направленной боковой цепью и проверка карты для трехмерной криоэлектронной микроскопии. Nat. Методы 12 , 943–946 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 63.

    Das, S.C. et al. Высококонсервативные остатки аргинина в положениях 76-78 матричного белка M1 вируса гриппа A играют важную роль в репликации вируса, влияя на внутриклеточную локализацию M1. Дж. Вирол . 86 , 1522–1530 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 64.

    Baudin, F., Petit, I., Weissenhorn, W. & Ruigrok, R. W. Рассечение in vitro мембраны и активности связывания RNP белка M1 вируса гриппа. Вирусология 281 , 102–108 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 65.

    Zhang, K. et al. Два полярных остатка в С-концевом домене M1 имеют решающее значение для образования вирионов гриппа А. Cell. Микробиол . 17 , 1583–1593 (2015).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 66.

    Wu, C. Y., Jeng, K. S. & Lai, M. M. C. SUMOylation матричного белка M1 модулирует сборку и морфогенез вируса гриппа А. Дж. Вирол . 85 , 6618–6628 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Матричный белок вируса бешенства отвечает за сборку и почкование пулевидных частиц и взаимодействует с трансмембранным гликопротеином Spike G

    J Virol.1999 Jan; 73 (1): 242–250.

    Отдел клинической вирусологии, Федеральный исследовательский центр вирусных болезней животных, D-72076 Тюбинген, Германия

    * Автор, ответственный за переписку. Почтовый адрес: Федеральный исследовательский центр вирусных болезней животных, Paul-Ehrlich-Strasse 28, D-72076 Tübingen, Германия. Телефон: 49 7071 967 205. Факс: 49 7071 967303. Электронная почта: [email protected]

    Текущий адрес: Intervet International b.v., NL-5830 AA Boxmeer, Нидерланды.

    Поступило 10 июня 1998 г .; Принято 18 сентября 1998 г.

    Copyright © 1999, Американское общество микробиологов Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

    Abstract

    Чтобы выяснить функции белка матрицы рабдовируса (M), мы определили локализацию M в вирусе бешенства (RV) и проанализировали свойства M-дефицитного мутанта RV. Мы предоставляем доказательства того, что М полностью покрывает спираль рибонуклеопротеина (РНП) и сохраняет ее в конденсированной форме. Как было определено в экспериментах по совместной седиментации, не только комплекс M-RNP, но и один только M, специфически взаимодействуют с гликопротеином G.Напротив, взаимодействие G с нуклеопротеином N или РНП без M не наблюдалось. В отсутствие M инфекционные частицы были в основном связаны с клетками, и выход внеклеточного инфекционного вируса был снижен в 500000 раз, демонстрируя решающую роль M в почковании вируса. Супернатанты от клеток, инфицированных M-дефицитным RV, не содержали типичных пулевидных частиц рабдовируса, а вместо этого содержали длинные палочковидные вирионы, демонстрирующие серьезное нарушение процесса образования вируса.Комплементация с белком М, экспрессируемым из плазмид, спасала образование рабдовируса. Эти результаты демонстрируют ключевую роль М-белка в конденсации и нацеливании РНП на плазматическую мембрану, а также во включении G-белка в почкующиеся вирионы.

    Матричные (M) белки вирусов с РНК с отрицательной цепью составляют основные структурные компоненты вируса и, как полагают, необходимы для сборки и образования почки вируса. Что касается рабдовирусов, первое понимание функции белка М было получено путем лечения вируса везикулярного стоматита (VSV) неионным детергентом и анализа интактных комплексов нуклеокапсид-M VSV.Изолированные субвирусные структуры, получившие название скелетов, напоминали интактные вирионы, несмотря на их увеличенную длину и меньший диаметр (3, 22). Эти результаты предполагают, что функция сборки вируса обусловлена ​​способностью M связывать и, вероятно, конденсировать нуклеокапсид (см. Ссылку 14). Что наиболее важно, скелетоподобные структуры также наблюдались возле плазматических мембран VSV-инфицированных клеток, показывая, что эти структуры представляют собой промежуточное звено между голым нуклеокапсидом и зрелыми вирионами (24).Было также показано, что VSV M связывается с плазматической мембраной даже в отсутствие других вирусных белков, и такой ассоциированный с мембраной M также способен связываться с нуклеокапсидом VSV in vitro (4, 5). Эти свойства белка М делают вероятным, что М функционирует в процессе сборки и почкования вируса, действуя как мост между нуклеокапсидом и плазматической мембраной.

    В вирусе гриппа матричный белок (M1), как предполагается, окружает нуклеокапсид (26), и было высказано предположение, что M1 взаимодействует с мембраной и, возможно, также с белками-шипами.Напротив, было предположено, что белок VSV M находится внутри спирали нуклеокапсида и доступен для контакта с липидным бислоем только на крайних концах (1). Это контрастирует с более общепринятым мнением, что M ответственен за конденсацию нуклеокапсида извне и что он локализован между клубком нуклеокапсида и мембраной (33). Как для VSV, так и для вируса гриппа из-за отсутствия четкой маркировки антителами не было получено убедительных данных о локализации M.

    Организация генома и структура вириона вируса бешенства (RV), прототипа рода Lyssavirus в семействе Rhabdoviridae , очень похожи на таковые VSV. В обоих вирусах несегментированная РНК с отрицательной цепью вместе с нуклеопротеином (N), фосфопротеином (P) и полимеразой (L) образует спиральный рибонуклеопротеиновый комплекс (RNP). В вирионе РНП окружен липидным бислоем, содержащим единственный трансмембранный гликопротеин-шип (G) и, якобы, матричный белок (M).Хотя центральная роль M белков несегментированных вирусов РНК с отрицательной цепью в процессе сборки и образования почкования вируса кажется очевидной, прямых экспериментальных доказательств их функций не предоставлено. Это произошло главным образом из-за отсутствия систем, которые позволяли бы прямые генетические манипуляции с несегментированными геномами вирусов с отрицательной цепью РНК. Эти технические трудности были преодолены путем разработки систем обратной генетики, позволяющих извлекать вирусы из кДНК, как впервые было описано для RV (31), которые в настоящее время используются для создания несегментированных мутантов вируса РНК с отрицательной цепью (см. Ссылку 9). .

    Недавно мы показали, что частицы в форме рабдовируса без шипов высвобождаются из клеток, инфицированных G-дефицитным мутантом, хотя и с 30-кратной эффективностью (21). Это продемонстрировало, что РНП, связанные с М-белком, могут быть обернуты мембраной и зачатком на поверхности клетки. Для VSV было показано, что M способен индуцировать образование везикул в отсутствие других белков VSV (13, 15), что указывает на то, что M-белок способен отщеплять мембраны автономно. Было показано, что помимо белка M, белки рабдовируса G вносят вклад в эффективность бутонизации и даже способны мобилизовать РНК или РНП (21, 25).Следовательно, высокоэффективное почкование рабдовирусов достигается за счет согласованного действия как шипов, так и ядер.

    Другая роль белка М в образовании вириона — его участие в морфогенезе вириона. Было показано, что сферические частицы высвобождались из клеток, инфицированных термочувствительным М-мутантом VSV при недопустимой температуре (16). Кроме того, участие M в определении образования сферических или нитевидных частиц было задокументировано для вирусов гриппа (34), предполагая ключевую роль белка M в морфогенезе вириона.

    Сообщается, что помимо их роли в сборке и почковании вируса, белки М рабдовирусов, вирусов гриппа и парамиксовирусов ингибируют транскрипцию вирусов (2, 6, 12, 18, 35, 37). Субгеномные мРНК этих групп вирусов транскрибируются с РНП, которые также служат матрицами для репликации полноразмерных РНК. В тесте транскрипции in vitro с изолированными РНП и М-белком VSV было показано, что активность ингибирования транскрипции М-белка обусловлена ​​реассоциацией М-белка с ядрами РНП (2).

    В этом отчете, основанном на биохимических исследованиях и подходах обратной генетики, мы показываем локализацию белка M в зрелом RV и описываем свойства мутанта RV, лишенного всего M-гена. Результаты демонстрируют, что М лежит между липидным бислоем и спиралью РНП и что в отсутствие белка М процесс сборки и почкования вируса серьезно нарушается. Электронная микроскопия показала плохое выделение только стержневидных частиц или круглых везикулярных структур, но не пулевидных вирусов.Последующая экспрессия белка M из плазмидной ДНК в клетках, инфицированных M-дефицитным мутантом, спасла высокие титры инфекционности и привела к высвобождению типичных частиц пулевидной формы, демонстрируя, что белок RV M ответственен за образование вирионов с пулевидным нравится морфология. Кроме того, мы предоставляем доказательства прямого взаимодействия G-белка с M.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Обработка вирионов моющими средствами и иммуноэлектронная микроскопия.

    Примерно 10 6 и 10 7 клеток BSR были инфицированы SAD L16 и SAD ΔM, соответственно, при множественности инфекции (MOI) 1.Примерно 5 × 10 8 вирионов SAD L16 обрабатывали либо 0,05% Triton X-100, либо 20 мМ октилглюкозидом в течение 15 минут при комнатной температуре. Обработанные моющим средством или необработанные контрольные образцы фиксировали 0,5% глутаральдегидом в течение 30 минут при 4 ° C и очищали центрифугированием через 20% сахарозу на 60% сахарозной подушке в роторе Beckman SW41 при 27000 об / мин в течение 90 минут. Затем интерфазу собирали путем бокового прокола. Покрытые углеродом никелевые сетки наносили в течение 7 мин на каплю вирусной суспензии и четыре раза промывали фосфатно-солевым буфером (PBS), содержащим 0.5% бычий сывороточный альбумин. Образцы инкубировали в течение 45 мин с моноклональным антителом против RV G (MAb) E543 (27), моноспецифической поликлональной кроличьей сывороткой против M (S66) или кроличьей сывороткой, полученной против очищенного RNP RV (S50), распознающей RV N и P-белки (21). Иммуноокрашивание проводили путем инкубации образцов с козьими антимышиными или козьими антителами против кроличьего иммуноглобулина G (Biocell, Кардифф, Великобритания), связанными с частицами золота 10 нм. После промывания PBS и дистиллированной воды образцы отрицательно окрашивали 1% уранилацетатом (без буфера) и исследовали в электронном микроскопе Zeiss 109.Микрофотографии сделаны при инструментальном увеличении × 50 000 на пленке Agfa Scientia 23D56.

    Конструирование клона кДНК.

    Чтобы удалить всю кодирующую белок М область из генома RV, следующие манипуляции были выполнены с полноразмерным клоном кДНК pSAD L16 (31), который обладает аутентичной последовательностью штамма RV SAD B19 (7). Сначала был создан субклон pSKpm24, содержащий фрагмент Eco RI- Xho I размером 2,7 т.п.н. pSAD L16, представляющий нуклеотиды SAD B19 с 1112 по 3823.Путем расщепления pSKpm24 Pfl MI и Xba I, последующего заполнения ферментом Кленова и повторного лигирования фрагмент кДНК, содержащий нуклеотиды SAD B19 с 2435 по 3176, был удален. Затем выделяли фрагмент Bst BI модифицированного pSKpm24 (положения SAD B19 с 1498 по 3739) и использовали для замены соответствующего фрагмента pSAD L16, чтобы получить pSAD ΔM.

    Восстановление М-дефицитного ПЖ.

    Эксперименты по трансфекции проводили, как описано ранее (10).Приблизительно 10 6 клеток BSR были инфицированы рекомбинантным вирусом осповакцины vTF7-3 (11), а затем трансфицированы смесью плазмид, содержащей 5 мкг pT7T-N, 2,5 мкг pT7T-P, 2,5 мкг pT7T-L, 2 мкг pT7T-M и 4 мкг pSAD ΔM с использованием набора для трансфекции млекопитающих Stratagene (протокол CaPO 4 ). Выделение трансфектантного вируса и удаление вируса коровьей оспы проводили, как описано ранее (31). Для пассажа SAD ΔM, который требовал для эффективности комплементации с белком М, клетки инкубировали с осветленным супернатантом, инфицировали vTF7-3 и трансфицировали 2 мкг pT7T-M, как описано выше.Для обнаружения репликации RV инфицированные клетки фиксировали 80% ацетоном и окрашивали конъюгатом, содержащим смесь MAb, направленную на белок RV N (Centocor). Запасы фенотипически комплементарного SAD ΔM получали после семи или восьми серийных пассажей. Инфекционные титры RV и M-дополненного SAD ΔM определяли путем серийных 10-кратных разведений и окрашивания инфицированных очагов или синцитий N-конъюгатом. В случае неполного SAD ΔM неразбавленный супернатант использовали для инфицирования клеток, а флуоресцентные синцитии подсчитывали через 24 часа после инфицирования.

    Анализ РНК и ОТ-ПЦР.

    Суммарную РНК, выделенную из инфицированных клеток, подвергали электрофорезу в денатурирующих гелях и анализировали с помощью Нозерн-гибридизации, как описано ранее (8). Фрагменты кДНК гена N или M RV метили с помощью ник-трансляции (набор для ник-трансляции Amersham) с помощью 32 P. ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) выполняли на 1 мкг общей РНК из инфицированных клеток. Обратная транскрипция с помощью обратной транскриптазы вируса миелобластоза птиц была примирована специфическим для гена RV P олигонуклеотидом, NS1P (5′-GTCGAATCCGACAAGCTG-3 ‘; нуклеотиды SAD B19 с 2345 по 2362).Амплификацию ДНК проводили с использованием праймера NS1P и специфичного для гена G праймера, G4M (5’-GGGTACAAACAGGACAGC-3 ‘; нуклеотиды SAD B19 с 3329 по 3346), или праймера, специфичного для гена M, M4M (5′-TTGCAATCCGACGAACTC-3’ ). Продукты ПЦР, полученные в результате 30 циклов (денатурация в течение 30 с при 94 ° C, отжиг в течение 60 с при 45 ° C и элонгация в течение 120 с при 72 ° C), анализировали на 1% агарозных гелях и использовали непосредственно для секвенирования.

    Метаболическое мечение и иммунопреципитация белков.

    Для поверхностной иммунопреципитации приблизительно 10 6 клеток BSR были инфицированы рекомбинантными RV при MOI 1.Через 16 часов инфицирования клетки метили 100 мкКи [ 35 S] метионина (1365 Ки / ммоль; ICN) в течение 3 часов. Меченые клетки затем инкубировали с MAb, направленным на белок RV G, в течение 45 минут при 4 ° C. Экстракцию антигена и иммунопреципитацию проводили, как описано ранее (21). Иммунопреципитированные белки анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и количественно оценивали с помощью фосфорного сканера (Fuji BAS1500).

    Центрифугирование в градиенте сахарозы и анализ белков.

    Для анализа бесклеточных вирионов приблизительно 10 6 и 10 7 клеток были инфицированы SAD L16 и SAD ΔM, соответственно, при MOI, равном 1. Для скоростного центрифугирования супернатанты собирали через 2 дня после заражения. наслоили на градиенты от 5 до 25% сахарозы, приготовленные в буфере TEN (10 мМ Трис [pH 7,4], 50 мМ NaCl, 1 мМ EDTA). Градиенты центрифугировали при 31 500 об / мин в роторе SW41 в течение 30 мин. Для анализа белкового состава ассоциированных с клетками инфекционных частиц равные количества инфицированных клеток пять раз промывали PBS и собирали соскабливанием монослоя в буфере TEN, pH 7.4. Клетки разрушали обработкой ультразвуком в течение 10 с при 100 Вт с помощью Sonifier B12 (Branson Sonic Power Company), и лизаты осветляли центрифугированием при 5000 × g в течение 5 минут при 4 ° C. Для изопикнического центрифугирования осветленные клеточные лизаты или супернатанты, содержащие высвободившиеся частицы, наслаивали на 10-70% непрерывных градиентов сахарозы и центрифугировали в роторе SW41 при 35000 об / мин в течение 18 часов. Были собраны равные количества 12 фракций, и аликвоты из каждой фракции были использованы для определения показателя преломления и титра инфекционных частиц путем разбавления конечной точки.Белки вируса из фракций градиента разделяли электрофорезом в полиакриламидном геле додецилсульфата натрия, переносили на нитроцеллюлозные мембраны и инкубировали со смесью кроличьей сыворотки, направленной против белков RV, как описано ранее (21). Белки визуализировали после инкубации с конъюгированным с пероксидазой козьим антикроличьим иммуноглобулином G (Dianova) с использованием набора для определения вестерн-блоттинга ECL (Amersham) (1-минутная инкубация) и экспонирования на рентгеновских пленках (Biomax MR; Kodak).

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    RV M располагается под липидным бислоем и окружает RNP.

    Виртуальная догма о том, что матричные белки лежат в основе липидного бислоя вируса, недавно была оспорена результатами, полученными в электронно-микроскопических исследованиях VSV, прототипа рабдовируса. Было высказано предположение, что VSV M находится внутри спирали RNP и что только часть M, которая выступает из концов RNP, способна контактировать с липидным бислоем (1). Для определения локализации M в вирионах RV супернатанты из культур инфицированных клеток собирали через 24 часа после заражения, обрабатывали детергентом и фиксировали глутаральдегидом.Затем вирионы очищали с использованием градиентов сахарозы. Электронно-микроскопическое исследование необработанных контрольных образцов, которые инкубировали с моноспецифической анти-М поликлональной кроличьей сывороткой, не показало маркировки на внешней поверхности, подтверждая, что М-белок не выходит через вирусную мембрану (фиг. A). Обработка вирионов 0,05% Triton X-100 удаляла липидный бислой вместе с поверхностным трансмембранным гликопротеином и приводила к субвирусным структурам той же длины, что и интактный ПЖ, но с меньшими диаметрами (от 50 до 60 нм), чем у интактного ПЖ (от 90 до 100 нм). ) (Инжир.). Подобные структуры VSV, обработанные октил-глюкозидом, были названы скелетами (3), и мы также используем этот термин для субвирусных структур RV, полученных после обработки Triton X-100. Формы наблюдаемых структур варьировались от интактных скелетов с остаточными липидными бислоями (Рис. B) до частично разобранных, в которых RNP выходили за пределы скелета (Рис. D). Эта неоднородность помогла нам определить расположение вирусных белков в различных структурах. При использовании анти-G MAb не было обнаружено золотого мечения скелетов, за исключением областей, где липидный бислой не был полностью удален (рис.Б). Для анализа локализации М-белка в субвирусной структуре обработанные частицы метили моноспецифической анти-М-сывороткой и исследовали с помощью электронной микроскопии. Интенсивное маркирование интактных скелетов наблюдалось в областях, полностью лишенных мембран, демонстрируя, что RV M лежит под липидным бислоем и покрывает нуклеокапсид (Fig. C). В частично разобранных каркасах маркировка M не была обнаружена на развернутых RNP, за исключением распутывающихся концов каркасов (не показаны).Инкубация таких частично разобранных скелетов с кроличьей сывороткой, полученной против очищенного RNP, привела к интенсивному мечению размотанного нуклеокапсида, но на поверхности неповрежденного скелета не наблюдали мечения золотом (рис. D). Очевидно, белок RV M покрывает всю поверхность конденсированных РНП. Даже после удаления мембраны белок М связывается с нуклеокапсидом и поддерживает его в компактной форме. При частичном удалении M катушка RNP освобождается на одном или обоих концах каркаса (рис.D). Интенсивная обработка детергентом привела к полной разборке структуры скелета (не показана), демонстрируя, что М-белок придает определенную форму, поддерживая конденсацию спирали RNP.

    Белок

    RV M расположен между липидным бислоем и спиралью RNP. Вирионы, обработанные Triton X-100 (от B до D), и необработанные контрольные образцы (A) очищали, как описано в разделе «Материалы и методы», и анализировали с помощью электронной микроскопии. Отсутствие анти-M-мечения на внешних мембранах необработанных вирионов (диаметром от 90 до 100 нм) (A) и интенсивное анти-M-мечение на поверхности спирали RNP или скелетов (диаметром от 50 до 60 нм) Вирионы, обработанные детергентом (C), демонстрируют, что M окружает спираль RNP.Только области, где липидный бислой не был полностью удален (от 60 до 70 нм в диаметре), слабо помечены анти-G MAb (B). В частично разобранном скелете (D) только развернутый нуклеокапсид, а не поверхность скелета, помечен сывороткой против РНП. Бар, 100 нм.

    Получение М-дефицитного мутанта RV.

    Анализ генно-инженерных вирусов, которые полностью лишены определенного гена и способности транс дополнять основные функции, оказался полезным при исследовании роли вирусных белков.Чтобы обратиться к функциям белка M RV в образовании вириона, мы сконструировали кДНК, в которой была удалена вся последовательность гена M RV (положения SAD B19 с 2435 по 3176) (фиг.). Чтобы спасти модифицированную кДНК в вирус, мы использовали ранее описанную систему (31), в которой транскрипты РНК-полимеразы Т7, соответствующие РНК антигенома RV, собраны в транскрипционно активные RNP в клетках, которые экспрессируют белки N, P и L. Неудивительно, что было невозможно восстановить инфекционные М-дефицитные вирионы с использованием стандартного протокола, что указывает на серьезное нарушение образования вируса в отсутствие М-белка.Поэтому мы дополнили дефекты во время экспериментов по восстановлению экспрессией белка М. Помимо плазмид, кодирующих белки N, P и L RV, и антигенома М-дефицитного мутанта (SAD ΔM), культуры клеток трансфицировали pT7T-M, кодирующим белок SAD B19 M (10). После инкубации в течение 2 дней присутствие вируса определяли с помощью прямой иммунофлуоресценции с анти-N конъюгатом. Запасы бесклеточного фенотипически комплементарного SAD ΔM получали после семи или восьми пассажей в клетках, временно экспрессирующих белок M RV из трансфицированных плазмид.Затем рекомбинантный вирус осповакцины vTF7-3, экспрессирующий РНК-полимеразу Т7, удаляли из полученного супернатанта фильтрованием.

    Организация М-дефицитного генома RV. Показаны полный геном RV с его пятью открытыми рамками считывания (вверху), детализированная область цистрона M (посередине) и область, охватывающая делецию (внизу). Стрелки и столбцы представляют собой сигналы начала и остановки транскрипции соответственно. В SAD ΔM весь цистрон M (нуклеотиды SAD L16 от 2435 до 3176) был удален путем делеции, начинающейся в нетранслируемой области гена P и заканчивающейся рядом с сигналом остановки транскрипции гена M.

    Чтобы сначала подтвердить отсутствие гена M в SAD ΔM, тотальную РНК выделяли из клеток, инфицированных фенотипически комплементарными вирионами SAD ΔM, и проводили ОТ-ПЦР. Путем использования специфичного для гена P праймера NS1P и специфичного для G-гена праймера G4M фрагменты ДНК размером ∼990 и ∼250 п.н. были получены из геномов SAD L16 и SAD ΔM, соответственно (не показаны). Разница в размерах ~ 740 п.н. соответствовала делеции, введенной в кДНК. Кроме того, с использованием праймера NS1P и праймера, специфичного к гену M, M4M, из генома SAD L16 был получен фрагмент ДНК размером ~ 600 п.н., но продукт из генома SAD ΔM не был обнаружен.Идентичность рекомбинантного вируса SAD ΔM дополнительно подтверждали секвенированием продуктов ПЦР и Нозерн-блоттингом общей РНК из клеток, инфицированных SAD ΔM или SAD L16. С зондом, охватывающим всю кодирующую область гена RV M, гибридизация SAD ΔM РНК не наблюдалась в Нозерн-блоттинге, что еще раз подтверждает отсутствие гена M (не показано). Как было определено с помощью фосфорного сканера, примерно в два раза больше мРНК N воспроизводимо присутствовало в SAD ΔM-инфицированных клетках, чем в SAD-L16-инфицированных клетках, что может частично отражать ослабление транскрипционной активности белка рабдовируса M (2, 6, 12 ).

    SAD ΔM индуцирует повышенное слияние клеток.

    Для исследования характеристик роста SAD ΔM в отсутствие белка RV M клетки инфицировали фенотипически комплементарными вирионами SAD ΔM с MOI, равным 1, и исследовали с помощью иммунофлуоресценции в разное время после заражения. Интересно, что клетки, инфицированные SAD ΔM, показали заметную активность слияния клеток с клетками уже через 24 часа после инфицирования. Напротив, клетки, инфицированные параллельно с SAD L16, не изменились даже до 72 часов заражения.Чтобы проанализировать этот неожиданный эффект SAD ΔM, инфицирование проводили при более низком MOI (0,005), и как живые, так и фиксированные клетки исследовали на морфологические изменения и экспрессию вирусного белка. Как показано на фиг. A, через 48 часов после инфицирования наблюдали повышенное слияние клеток с клетками в клетках, инфицированных SAD ΔM. Слитые клетки начали отделяться от монослоя и плавать в супернатанте через 72 часа после инфицирования. Напротив, клетки, инфицированные вирусом дикого типа, не показали значительных изменений даже через 72 часа после заражения.

    SAD ΔM вызывает повышенное слияние клеток и гибель клеток. (A) После инфицирования культур с MOI 0,005 живые клетки исследовали под микроскопом на морфологические изменения в указанные моменты времени. Слияние клеток обнаруживается в SAD ΔM-инфицированных клетках через 48 часов, а через 72 часа после инфицирования присутствуют большие синцитии. (B) В клетках, инфицированных параллельно, распространение инфекции контролировали в указанные моменты времени с помощью прямой иммунофлуоресценции с конъюгатом, направленным против белка N RV.Вторичное инфицирование клеток, о чем свидетельствует появление флуоресцирующих гранул, практически отсутствует в SAD ΔM. Через 48 ч экспрессия SAD ΔM N обнаруживается в больших синцитиях.

    Для сравнения распространения SAD ΔM и SAD L16, инфицированные культуры клеток фиксировали ацетоном и исследовали методом прямой иммунофлуоресценции с анти-N конъюгатом (рис. B). В культурах, инкубированных с SAD L16, первичная инфекция единичных клеток распространилась на соседние клетки в течение 24 часов, о чем свидетельствует появление небольших флуоресцентных гранул.Через 48 часов после инфицирования наблюдали большие очаги приблизительно от 50 до 100 флуоресцирующих клеток, а через 72 часа инфицировали весь клеточный монослой. Напротив, типичные маленькие флуоресцентные гранулы ранней инфекции RV полностью отсутствовали через 24 часа после инфицирования в культурах, инкубированных с SAD ΔM. Через 48 часов после инфицирования было обнаружено, что клетки, экспрессирующие белок RV N, сливаются с соседними клетками и образуют большие многоядерные синцитии, что не является характерным свойством для стандартной инфекции RV.Через 72 часа эти синцитии начинают распадаться на мелкие кусочки и либо остаются на монослое, либо плавают в супернатанте (рис.).

    G-белок накапливается до высоких уровней на поверхности клеток, инфицированных вирусом SAD ΔM.

    Предыдущие результаты, полученные с G-дефицитным мутантом RV, показали, что инфицирование клеток супернатантом вируса и распространение RV от клетки к клетке полностью зависят от присутствия G-белка (21). Поскольку скорость внутриклеточного транспорта и накопления G-белка на поверхности клетки может влиять на характеристики роста RV, клетки, инфицированные SAD ΔM и SAD L16, анализировали на количество G-белка, экспрессируемого на клеточной поверхности.Через 16 часов инфицирования клетки метили 100 мкКи [ 35 S] метионина в течение 3 часов, инкубировали с анти-G MAb и анализировали с помощью поверхностного иммунопреципитации (фиг.). Согласно количественной оценке с помощью фосфорного визуализатора, общее количество G-белка в клетках, инфицированных SAD ΔM, было только на 3% больше, чем в клетках, инфицированных SAD L16. Однако количество G-белка, присутствующего на поверхности инфицированных клеток, было в 2,6 раза больше для клеток, инфицированных SAD ΔM. G клеточной поверхности составлял 13 и 33% от общего содержания G для SAD L16 и SAD ΔM, соответственно.Поскольку G является единственным белком RV, который обладает активностью слияния, повышенное накопление G-белка на клеточной поверхности может быть ответственным за усиленное слияние клеток в SAD ΔM-инфицированных клетках.

    Анализ экспрессии G белков на клеточной поверхности. Приблизительно 10 6 клеток BSR были инфицированы при MOI, равном 1, и через 16 часов были помечены 100 мкКи [ 35 S] метионина в течение 3 часов. Анти-G MAb инкубировали с живыми клетками для связывания G-белков, экспрессируемых на поверхности клетки, или с клеточными лизатами, содержащими общий G-белок.Количественное определение с помощью Phoshorimager показало, что уровень G-белка в 2,6 раза выше на поверхности клеток, инфицированных SAD ΔM.

    M — движущая сила в сборке и почковании вируса.

    Характерная картина распространения, наблюдаемая для SAD ΔM в культуре клеток, и высокий уровень накопления G-белка на поверхности клеток, инфицированных SAD ΔM, указывают на дефект в процессе сборки и почкования вируса. Для определения эффективности образования и высвобождения вируса некомплементарные клетки инфицировали при MOI, равном 1, фенотипически комплементарными вирионами SAD ΔM.Супернатанты, а также клеточные экстракты титровали через 24, 48 и 72 часа после заражения. По сравнению с таковым для SAD L16, общее количество инфекционного SAD ΔM, включая как ассоциированный с клеткой, так и внеклеточный вирус, было снижено примерно в 600 раз через 24 часа и 10000 через 48 часов после инфицирования (таблица). Когда сравнивали только титры внеклеточного инфекционного вируса, выход снижался в 5 × 10 5 раз. В соответствии с этим было обнаружено, что 98% инфекционных частиц SAD ΔM связаны с клетками, по сравнению с менее чем 10% для вируса дикого типа через 48 часов после инфицирования.Это указывает на серьезные дефекты сборки вируса и механизма почкования в отсутствие белка М (таблица).

    ТАБЛИЦА 1

    Титры высвобожденного и ассоциированного с клетками RV

    1,5 98
    Вирус ч после инфицирования Фокусообразующие единицы / мл a в:
    % Клеточно-ассоциированный вирус b
    Супернатант Клеточный лизат
    SAD L16 24 3.5 × 10 6 4,5 × 10 6 56
    SAD ΔM 24 6 × 10 1 1,2 × 10 4 L16 48 1,6 × 10 8 1,5 × 10 7 8,6
    SAD ΔM 48 3 × 10 2
    SAD L16 72 8 × 10 7 1 × 10 6 1.3
    SAD ΔM 72 1,8 × 10 2 7,5 × 10 3 97,7
    Физические характеристики инфекционных частиц SAD ΔM.

    Для анализа скорости оседания инфекционных частиц супернатанты от клеток, инфицированных SAD ΔM, наслаивали на непрерывный градиент сахарозы от 5 до 25% и центрифугировали при 31 500 об / мин в роторе SW41 в течение 30 мин. Двенадцать равных фракций были собраны из градиента, и инфекционность отдельных фракций была определена разбавлением конечной точки.Для RV дикого типа пик инфекционности был во фракциях 9 и 10 (нумерация ведется сверху вниз градиента), тогда как для SAD ΔM большинство инфекционных частиц было обнаружено в двух различных пиках, охватывающих фракции 7 и 8 и фракция 11. Этот результат показал, что размер частиц ΔM SAD значительно отличается от размера RV дикого типа. Для определения плотности инфекционных частиц SAD ΔM образцы осаждали до равновесия на непрерывных градиентах сахарозы от 10 до 70% и определяли инфекционность 12 равных фракций, как описано выше.Плотность фракций, содержащих большую часть инфекционных SAD ΔM и SAD L16, составила 1,17 и 1,16 г / см 3 соответственно.

    RV M взаимодействует с G.

    Постулируется, что взаимодействие между G и M и / или N необходимо для эффективного размножения рабдовирусов (17, 21). Однако прямых доказательств в поддержку этой центральной догмы было мало. Таким образом, ожидалось, что анализ мутанта ΔM SAD даст ключ к пониманию того, взаимодействует ли G с M, N или RNP.Поскольку большинство инфекционных частиц SAD ΔM связаны с клетками, мы проанализировали белковый состав и инфекционность связанных с клетками частиц после равновесного центрифугирования на градиентах сахарозы. Общие клеточные лизаты получали, как описано в разделе «Материалы и методы», наслаивали на градиент от 10 до 70% сахарозы и фракционировали, как описано выше. Расположение вирусных белков определяли с помощью вестерн-блоттинга, а также определяли инфекционность и показатели преломления отдельных фракций. Большинство клеточно-ассоциированных инфекционных вирионов SAD L16 локализовано во фракции 6 (2 × 10 6 / мл), которая также содержит наибольшее количество вирусных белков (рис.). Инфекционность связанного с клетками SAD ΔM также достигла пика во фракции 6 (1,5 × 10 3 / мл), плотность которой составляет 1,14 г / см 3 . Другой пик белка в обоих градиентах, в котором детектировался в основном N, был локализован во фракции 9 для SAD L16 и во фракциях 9 и 10 для SAD ΔM. Плотность 1,21 г / см 3 для фракции 9 в обоих градиентах идентична плотности RNP RV, полученной после обработки очищенных вирионов детергентом (21).

    Белковый состав ассоциированных с клетками вирионов SAD L16 и SAD ΔM.Клеточные экстракты приблизительно из 10 6 инфицированных клеток получали, как описано в разделе «Материалы и методы», и очищали центрифугированием в градиенте от 10 до 70% сахарозы. Двенадцать равных градиентных фракций (пронумерованных сверху вниз) анализировали вестерн-блоттингом на наличие вирусных белков. Плотность сахарозы определяли по показателю преломления каждой фракции. Для обоих препаратов пик инфекционности присутствовал во фракции 6, которая имеет плотность 1,14 г / см 3 .

    Поразительное различие между двумя градиентами было в пропорциях белка N, локализованного в двух пиках (рис.). В то время как белок N во фракциях 5 и 6, где G также колокализуется, в градиенте SAD L16 составляет 36% от общего белка N, только 6% белка SAD ΔM N локализовано в соответствующих фракциях. Отсутствие совместной локализации SAD ΔM RNP с G-белком указывает на то, что только те RNP, которые заключены в M-белок, способны специфически взаимодействовать с spike-белком.Чтобы исследовать, может ли M по отдельности взаимодействовать с G или необходимо ли образование комплекса M-RNP, мы экспрессировали белки M, N и G RV либо по отдельности, либо в комбинациях и проанализировали клеточные лизаты путем осаждения на градиентах сахарозы. Когда белок М экспрессировался в отсутствие других вирусных белков, около 10% М оставалось в пределах трех верхних фракций градиента, тогда как более 90% перемещалось в нижнюю часть градиента и достигало пика во фракциях 6 и 7 (рис. ). Когда G экспрессировался отдельно, большая часть G была локализована во фракциях от 3 до 5.Наиболее интересно то, что когда M и G были коэкспрессированы, локализация M оставалась неизменной, но G следовала за M и колокализовалась с ней на протяжении всего градиента, за исключением вершины. Напротив, характер распределения G оставался неизменным, когда он коэкспрессировался с белком N, что позволяет предположить отсутствие прямого взаимодействия G-N. Эти результаты показали, что M способен взаимодействовать с G даже в отсутствие других вирусных компонентов, а также в форме комплекса M-RNP (рис.). Очевидно, взаимодействие между G и комплексом RNP-M является критическим для эффективного отпочкования вирионов инфекционного потомства.

    RV M взаимодействует с G. Примерно 10 6 клеток BSR сначала инфицировали vTF7-3, а затем трансфицировали 5 мкг плазмидной ДНК. После 16 ч инфицирования получали лизаты клеток, центрифугировали до равновесия и анализировали, как описано для рис. (А) Градиенты плотности клеток, индивидуально экспрессирующих G, N или M белок; (B) клетки, коэкспрессирующие белки G и N или белки G и M. Когда белки G и M коэкспрессируются, белок G совмещается с белком M (нумерация ведется сверху вниз по градиенту).

    M придает RV форму пули.

    Как показано выше, инфекционные частицы, продуцируемые в SAD ΔM-инфицированных клетках, во многих отношениях отличались от RV дикого типа. Для анализа морфологии инфекционных частиц, высвобождаемых в отсутствие белка М, образцы супернатанта фиксировали 0,5% глутаровым альдегидом и очищали в градиенте сахарозы. Образцы инкубировали с MAb, направленным против белка G RV, окрашивали вторичным антителом, связанным с коллоидным золотом, и исследовали с помощью иммуноэлектронной микроскопии.Хотя контрольные образцы, полученные параллельно из клеток, инфицированных SAD L16, содержали почти исключительно типичные частицы пулевидной формы, нам неоднократно не удавалось обнаружить даже одну частицу пулевидной формы в образцах, приготовленных из клеток, инфицированных SAD ΔM. Вместо этого последние образцы содержали либо уникальные длинные стержневидные частицы меньшего диаметра, либо округлые везикулярные структуры (рис. A – C). Длинные палочковидные частицы, которые были обнаружены исключительно в супернатантах клеток, инфицированных SAD ΔM, сильно различались по размеру: от 500 до 1000 нм на 50 нм, по сравнению с 200-300 нм на 95 нм для RV дикого типа.Оба типа частиц были помечены анти-G MAb, что показало, что они содержат на своей поверхности белок G-шип. Из-за высокого накопления G-белка на поверхности клеток, инфицированных SAD ΔM, частицы могли неспецифически приобрести G-белок. Были также предприняты попытки визуализировать вирионы SAD ΔM, отпочковывающиеся с поверхности инфицированных вирусом клеток, путем изучения тонких срезов в электронном микроскопе. Однако нам не удалось обнаружить какие-либо вирусоподобные отростки частиц на плазматической мембране, дополнительно подтверждая, что в отсутствие M, RNPs сами по себе не компетентны для отпочкования даже на G-содержащих мембранах.

    Морфология частиц, высвобождаемых из клеток, инфицированных SAD ΔM. SAD ΔM выращивали в отсутствие белка M RV (от A до C) или в клетках, которые экспрессируют белок M RV из трансфицированных плазмид (D). Очищенные супернатанты приблизительно от 10 7 SAD ΔM-инфицированных клеток BSR иммуноокрашивали с помощью MAb, специфичных для белка G RV, и анализировали с помощью электронной микроскопии. В отсутствие белка RV M были обнаружены либо длинные палочковидные частицы (A и B), либо круглые везикулярные структуры (C), но не были обнаружены частицы в форме пули.После экспрессии белка RV M большинство частиц имело типичную пулевидную морфологию рабдовируса (D). Бар, 100 нм.

    Чтобы подтвердить возможность исправления наблюдаемых дефектов в процессе сборки и почкования мутанта SAD ΔM RV, мы дополнили дефицит M экспрессией белка M RV в инфицированных клетках. Полученный супернатант анализировали на инфекционность путем разбавления до конечной точки и на морфологию частиц с помощью электронной микроскопии, как описано выше. После комплементации SAD ΔM выход инфекционных частиц через 24 часа после трансфекции увеличился примерно в 10000 раз, с 10 2 / мл (SAD ΔM) до 10 6 / мл (SAD ΔM плюс M), таким образом достигнув 1% от максимальные титры SAD L16.Это указывает на облегчение основных дефектов с помощью белка М, представленного в trans . Более того, увеличение титра в супернатанте сопровождалось образованием типичных частиц пулевидной формы (рис. D). Хотя круглые везикулярные структуры все еще присутствовали в меньшем количестве, длинные палочковидные частицы практически отсутствовали в супернатантах после комплементации с белком М из трансфицированных плазмид. Взятые вместе, эти результаты показывают абсолютную потребность в белке рабдовируса М для эффективной сборки и образования почки вируса, а также для пулевидной морфологии.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Считается, что в пути сборки РНК-вирусов с отрицательной цепью этапы, следующие за инкапсидацией РНК-генома нуклеопротеином и, наконец, приводящие к почкованию зрелых вирусных частиц, включают матричный (M) белок. Однако знания о биологических функциях M белка ограничиваются в основном свойствами связывания с мембраной или нуклеокапсидом (рассмотрено в ссылке 14), и более прямых доказательств того, что M белок действительно выполняет сборку вируса и почкование, не было.Недавно сообщалось, что белок M VSV, прототипа рабдовируса, локализован внутри спирали RNP (1), что ставит под сомнение общее представление о том, как белки M вносят вклад в сборку вируса. В этой работе мы показываем локализацию M-белка в вирионах RV и описываем рекомбинантный мутантный RV, в котором отсутствует весь M-ген. Характеристика этого не содержащего хелперного вируса мутанта с дефицитом М дала более глубокое понимание роли белка М на различных стадиях образования вируса, включая сборку вирусного белка, морфогенез и высвобождение зрелых вирионов.

    Чтобы определить локализацию белка M в зрелом RV, чтобы понять, как он проявляет свое действие на различных стадиях образования вириона, мембраны зрелых вирионов были отслоены с помощью неионного детергента. После мечения полученных субвирусных структур иммунным золотом на поверхности неповрежденного спиралевидного нуклеокапсида, так называемого скелета, наблюдали интенсивное мечение анти-M золотом. Напротив, метка анти-RNP была связана только с развернутыми RNP, идущими от скелетов, а не на поверхности интактных скелетов.Как интенсивное мечение интактных скелетов M, так и их недоступность для антител N и P указывают на то, что клубок RNP полностью покрыт M-белком. Удаление белка M из скелетов, по-видимому, приводит к раскручиванию RNP, которое затем может быть помечено антителами против RNP. Таким образом, слой белка М, окружающий скелеты, отвечает за сохранение RNP в конденсированной форме. Таким образом, целостность и форма скелета правого желудочка определяются конденсирующим эффектом М-белка.

    Открытие, что RV M лежит под липидным бислоем и окружает RNP, противоречит результатам, опубликованным для VSV (1). Было высказано предположение, что М-белок VSV находится только внутри спирали нуклеокапсида и может взаимодействовать с мембраной только на крайних концах. Отсутствие маркировки анти-M на поверхности скелетов VSV может быть связано с конформационными различиями между VSV M внутри спиралей RNP и VSV M, которые могут окружать RNP, так что эпитопы последнего, возможно, были недоступны для используемых антител.В качестве альтернативы, белок М вне спирали РНП может быть быстро удален в используемых условиях, в то время как белок внутри может быть более устойчивым и достаточным для сохранения конденсированных скелетов. Однако нельзя исключить существенное различие в структурной организации двух рабдовирусов (см. Ниже). Фактически, в отличие от случая для RV, мы также могли наблюдать центральные структуры, напоминающие описанный сигарный сердечник (1) в частично развернутых RNP VSV (не показаны).

    Чтобы выяснить важность белка M RV в образовании вирионов, мы создали мутант SAD ΔM RV, в котором отсутствует весь ген M.Способ распространения SAD ΔM в культуре клеток значительно отличался от такового для RV дикого типа. Клетки, инфицированные SAD ΔM, показали повышенное слияние клеток и повышенную гибель клеток, в отличие от нецитопатического типа роста RV дикого типа в культуре клеток. Когда инфицирование проводилось при низкой MOI (0,005), образование гигантских многоядерных клеток было более очевидным. Такие синцитии достигают максимального размера через 48 ч после заражения, а затем начинают распадаться. Хотя RV является скорее нецитопатогенным вирусом, более высокое накопление G-белка RV в инфицированных клетках было связано с усилением цитопатических эффектов в фибробластах и ​​индуцированным RV апоптозом в лимфоцитах (23, 36).Таким образом, 2,6-кратный более высокий уровень экспрессии G-белка на поверхности клеток, инфицированных SAD ΔM, по сравнению с SAD L16, может объяснить усиление слияния клеток и цитопатических эффектов, наблюдаемых в культурах, инфицированных SAD ΔM. Кроме того, накопление высокого уровня G на поверхности клеток, инфицированных SAD ΔM, убедительно свидетельствует о низком уровне истощения поверхностного G за счет почкующихся вирионов.

    Обнаружение того, что общее количество инфекционных частиц ΔM SAD было уменьшено до 10 000 раз, а количество бесклеточных частиц уменьшилось в 5 × 10 5 раз, выявило серьезные дефекты в процессе образования вирусов. если М-протеин отсутствует.Как показано центрифугированием в градиенте плотности ассоциированных с клетками инфекционных частиц, средний пик в градиенте SAD L16 составлял 36% от общего RNP, по сравнению только с 6% от соответствующего SAD ΔM RNP (рис.). Фракция 6 в обоих градиентах содержала большинство инфекционных частиц и, предположительно, большинство конденсированных ядер RNP-M в градиенте SAD L16. Было продемонстрировано, что такие конденсированные ядра RV RNP-M способны отрастать на поверхности клетки и созревать в частицы без шипов (21).Таким образом, значительное снижение образования инфекционных частиц SAD ΔM происходит, главным образом, из-за отсутствия ядер RNP-M, которые могут представлять минимальную субвирусную структуру, способную к почкованию. Предположительно, конденсированные RNPs, т.е. RNPs, окруженные M белком, уже приобретают скелетоподобную структуру внутриклеточно и не требуется большого изменения формы во время окутывания и отпочкования. Таким образом, способ, которым РНП вирусов с отрицательной цепью РНК конденсируются с помощью их М-белков, может быть основой морфологической изменчивости и эффективности высвобождения вириона.

    Интересно, что более 98% инфекционных частиц SAD ΔM были связаны с клетками, по сравнению с менее чем 10% для SAD L16. Это говорит о том, что промежуточные соединения сборки, обнаруженные во фракции 6 SAD ΔM-инфицированных клеток, не были компетентны для обволакивания плазматической мембраной. Высвободившиеся инфекционные частицы SAD ΔM, хотя и гетерогенные по размеру, имеют плотность, аналогичную плотности RV дикого типа, что указывает на то, что они также состоят из окруженных RNP, но в неконденсированной форме.Такие неконденсированные RNP могут быть заключены в G-содержащие мембраны и выпущены в супернатант. Поскольку было показано, что белки G рабдовируса автономно мобилизуют даже неродственные РНК или РНП (21, 25), этот процесс высвобождения частиц ΔM SAD не представляет собой нормальный механизм почкования вируса. Мы предполагаем, что длинные стержнеобразные частицы содержат неконденсированные RNP и составляют все свободные инфекционные частицы SAD ΔM. Однако мы не можем исключить возможность того, что некоторые из круглых везикул, содержащих G-белок, также могут содержать РНП-подобные структуры, поскольку наблюдались частицы как с электронно-плотным содержимым, так и без него (рис.C). Однако полное отсутствие частиц пулевидной формы в супернатантах клеток, инфицированных SAD ΔM, показывает абсолютную потребность в М-белке для характерной морфологии рабдовируса. Кроме того, после временной экспрессии белка RV M в клетках, которые были инфицированы SAD ΔM, большинство высвобожденных частиц имело типичную морфологию пулевидной формы. Титр в супернатанте также увеличился в 10 000 раз, что ясно показывает центральную роль белков рабдовируса М как в морфогенезе вируса, так и в процессе почкования.

    Было продемонстрировано, что для эффективного отпочкования RV необходимо согласованное действие как ядра (т. Е. RNPs, окруженного M-белком), так и spike-белка (21). Кроме того, цитоплазматический хвост RV G, как было показано, содержит сигнал для управления эффективным включением не только G, но также химерных белков с чужеродными трансмембранными доменами и эктодоменами в оболочки почкующихся вирионов (19-21). Эти данные свидетельствуют о том, что цитоплазматический хвост RV G специфически взаимодействует с одним или несколькими внутренними вирусными белками, облегчая как сортировку поверхностных белков в вирусные оболочки, так и эффективное почкование.Настоящие результаты показывают, что М является единственным внутренним вирусным белком, с которым цитоплазматический хвост G может взаимодействовать. Скелет нуклеокапсида ПЖ полностью покрыт М, что делает его недоступным для антител и, вероятно, также для цитоплазматического хвоста G. Отсутствие совместной локализации M-less RNPs и G белка в градиентах ΔM SAD дополнительно подтверждает идею о том, что цитоплазматические хвосты G взаимодействуют исключительно с RV M, локализованным между мембраной и нуклеокапсидом. Это дополнительно подтверждается обнаружением совместной локализации между M-RNP и G в RV дикого типа (рис.), а также совместного оседания M и G в отсутствие какого-либо другого вирусного белка (рис.). Очевидно, что взаимодействие между G и комплексом RNP опосредуется слоем M, что обеспечивает эффективное высвобождение вирионов инфекционного потомства.

    В отличие от RV, близкородственный VSV, по-видимому, использует неспецифический способ включения белка G VSV (28) или гетерологичных поверхностных белков (29, 32) в оболочку. Например, было обнаружено, что человеческий трансмембранный белок CD4 встраивается в оболочку вируса с той же эффективностью, что и химерный CD4, содержащий трансмембранный и цитоплазматический домены VSV G (29, 32).В отличие от VSV, белки CD4 и человеческого хемокинового рецептора CXCR4 эффективно включались в производную от RV оболочку только при наличии аутологичного G-хвоста (20, 30). Мы показали здесь, что белок M RV взаимодействует с G и, таким образом, отвечает за рекрутирование белка G в вирус. Сейчас мы идентифицируем остатки цитоплазматического хвоста, ответственные за это взаимодействие (неопубликованные данные). Прямое взаимодействие VSV M и VSV G однозначно пока не показано (4, 17).Если рассматривать локализацию VSV M как RV-подобную, убедительные различия во включении спайкового белка VSV и RV можно объяснить менее строгим и более слабым взаимодействием между M и G. RNP, как недавно было предложено (1), должно быть постулировано фундаментальным различием в механизмах сборки RV и VSV. В такой ситуации взаимодействия M-G, возможно, не будут иметь значения, и это может быть отражено наблюдаемым неселективным включением поверхностных белков VSV.Только часть белка M, выступающая из концов RNPs, могла бы оставаться способной контактировать с G-содержащими мембранами. Более того, локализация M белка в VSV внутри спирали RNP потребует существенно модифицированной модели того, как достигается эффективное почкование.

    БЛАГОДАРНОСТИ

    Мы благодарим K. Kegreiss, V. Schlatt и K. Mildner за их безупречную техническую помощь и W. Kramer за фотографические работы.

    Работа поддержана грантом BEO / 0311171 от Bundesministerium für Forschung und Technologie.

    ССЫЛКИ

    1. Баржа A, Годен Y, Кулон П., Руигрок Р. В. Белок М вируса везикулярного стоматита может находиться внутри спирали рибонуклеокапсида. J Virol. 1993. 67: 7246–7253. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 2. Кэрролл А. Р., Вагнер Р. Р. Роль мембранного (М) белка в эндогенном ингибировании транскрипции in vitro вирусом везикулярного стоматита. J Virol. 1979; 29: 134–142. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 3. Картрайт Б., Смейл С. Дж., Браун Ф. Рассечение вируса везикулярного стоматита на инфекционный рибонуклеопротеин и иммунизирующие компоненты.J Gen Virol. 1970; 7: 19–32. [PubMed] [Google Scholar] 4. Чонг Л. Д., Роуз Дж. К. Мембранная ассоциация функционального матричного белка вируса везикулярного стоматита in vivo. J Virol. 1993. 67: 407–414. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Чонг Л. Д., Роуз Дж. К. Взаимодействие нормальных и мутантных матричных белков вируса везикулярного стоматита с плазматической мембраной и нуклеокапсидами. J Virol. 1994; 68: 441–447. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Клинтон Г. М., Литтл С. П., Хаген Ф. С., Хуанг А. С. Матричный белок (М) вируса везикулярного стоматита регулирует транскрипцию.Клетка. 1978; 15: 1455–1462. [PubMed] [Google Scholar] 7. Конзельманн К. К., Кокс Дж. Х., Шнайдер Л. Г., Тиль Х. Дж. Молекулярное клонирование и полная нуклеотидная последовательность ослабленного вируса бешенства SAD B19. Вирусология. 1990; 175: 485–499. [PubMed] [Google Scholar] 8. Конзельманн К. К., Кокс Дж. Х., Тиль Х. Дж. РНК интерферирующей частицы, дефектной по L (полимеразе) вируса бешенства, реплицируется и транскрибируется гетерологичными белками L хелперного вируса. Вирусология. 1991; 184: 655–663. [PubMed] [Google Scholar] 10. Конзельманн К.К., Шнелл М.Спасение синтетических геномных аналогов РНК вируса бешенства с помощью белков, кодируемых плазмидами. J Virol. 1994; 68: 713–719. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Фуэрст Т. Р., Найлс Э. Г., Студьер Ф. В., Мосс Б. Эукариотическая система временной экспрессии на основе рекомбинантного вируса осповакцины, который синтезирует РНК-полимеразу бактериофага Т7. Proc Natl Acad Sci USA. 1986; 83: 8122–8126. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Ито Ю., Нишизоно А., Маннен К., Хирамацу К., Мифуне К. Белок М вируса бешенства, экспрессируемый в Escherichia coli, и его регулирующая роль в активности транскриптазы, связанной с вирионом.Arch Virol. 1996. 141: 671–683. [PubMed] [Google Scholar] 13. Джастис П. А., Сан В., Ли Й., Йе З., Григера П. Р., Вагнер Р. Р. Функция мембранной везикуляции и экзоцитоз дикого типа и мутантных матричных белков вируса везикулярного стоматита. J Virol. 1995; 69: 3156–3160. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 14. Ленард Дж. Белки вируса М с отрицательной цепью и протеины МА ретровируса: все в семье? Вирусология. 1996; 216: 289–298. [PubMed] [Google Scholar] 15. Ли Y, Луо Л., Шуберт М., Вагнер Р. Р., Канг С. Ю. Вирусные липосомы, высвобождаемые из клеток насекомых, инфицированных рекомбинантным бакуловирусом, экспрессирующим матричный белок вируса везикулярного стоматита.J Virol. 1993; 67: 4415–4420. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Лайлс Д.С., Маккензи М., Каптур П.Е., Грант К.В., Джером В.Г. Комплементация мутантов М-гена вируса везикулярного стоматита М-белком, полученным из плазмиды, превращает сферические внеклеточные частицы в нативные формы пули. Вирусология. 1996. 217: 76–87. [PubMed] [Google Scholar] 17. Lyles D S, McKenzie M, Parce J W. Взаимодействия субъединиц гликопротеина оболочки вируса везикулярного стоматита, стабилизированные путем связывания с вирусным матричным белком.J Virol. 1992; 66: 349–358. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Маркс П. А., Портнер А., Кингсбери Д. В. Комплекс транскриптазы вириона Сендай: состав полипептидов и ингибирование белками оболочки вириона. J Virol. 1974; 13: 107–112. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 19. Mebatsion T, Conzelmann KK. Специфическая инфекция CD4 + клеток-мишеней псевдотипами рекомбинантного вируса бешенства, несущими белок оболочки ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci USA. 1996; 93: 11366–11370. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20.Mebatsion T, Finke S, Weiland F, Conzelmann KK. Рабдовирус псевдотипа CXCR4 / CD4, который избирательно инфицирует клетки, экспрессирующие белок оболочки ВИЧ-1. Клетка. 1997; 90: 841–847. [PubMed] [Google Scholar] 21. Mebatsion T, König M, Conzelmann K. Почкование частиц вируса бешенства в отсутствие гликопротеина шипа. Клетка. 1996; 84: 941–951. [PubMed] [Google Scholar] 22. Ньюкомб В. В., Браун Дж. С. Роль матричного белка вируса везикулярного стоматита в поддержании вирусного нуклеокапсида в конденсированной форме, обнаруженной в нативных вирионах.J Virol. 1981; 39: 295–299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Ni Y, Iwatani Y, Morimoto K, Kawai A. Исследования необычных цитоплазматических структур, которые содержат белки оболочки вируса бешенства. J Gen Virol. 1996; 77: 2137–2147. [PubMed] [Google Scholar] 24. Оденвальд В. Ф., Арнхейтер Х., Дюбуа-Дальк М., Лаззарини Р. А. Стерео-изображения сборки вируса везикулярного стоматита. J Virol. 1986; 57: 922–932. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25. Роллс М. М., Вебстер П., Бальба Н. Н., Роуз Дж. К. Новые инфекционные частицы, генерируемые экспрессией гликопротеина вируса везикулярного стоматита из самореплицирующейся РНК.Клетка. 1994. 79: 497–506. [PubMed] [Google Scholar] 26. Руигрок Р. В., Колдер Л. Дж., Уортон С. А. Электронная микроскопия субмембранной структуры вируса гриппа. Вирусология. 1989; 173: 311–316. [PubMed] [Google Scholar] 27. Шнайдер Л., Мейерс С. Антигенные детерминанты вируса бешенства, продемонстрированные моноклональными антителами. В: Епископ D H L, Compans R W, редакторы. Репликация вирусов с отрицательной цепью РНК. Амстердам, Нидерланды: Эльзевир; 1981. С. 947–953. [Google Scholar] 28. Шнелл М. Дж., Буонокор Л., Ботиц Е., Гош Х. П., Черниш Р., Роуз Дж. К.Необходимость в неспецифической последовательности цитоплазматического домена гликопротеина для эффективного отпочкования вируса везикулярного стоматита. EMBO J. 1998; 17: 1289–1296. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 29. Шнелл М. Дж., Буонокор Л., Кретчмар Е., Джонсон Е., Роуз Дж. К. Чужеродные гликопротеины, экспрессируемые из рекомбинантных вирусов везикулярного стоматита, эффективно включаются в вирусные частицы. Proc Natl Acad Sci USA. 1996; 93: 11359–11365. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Шнелл М. Дж., Джонсон Дж. Э, Буонокор Л., Роуз Дж. К.Создание нового вируса, который нацелен на клетки, инфицированные ВИЧ-1, и контролирует инфекцию ВИЧ-1. Клетка. 1997; 90: 849–857. [PubMed] [Google Scholar] 32. Шуберт М., Джоши Б., Блондель Д., Хармисон Г. Г. Вставка рецептора CD4 вируса иммунодефицита человека в оболочку частиц вируса везикулярного стоматита. J Virol. 1992; 66: 1579–1589. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Саймонс К., Гарофф Х. Механизмы почкования оболочечных вирусов животных. J Gen Virol. 1980; 50: 1–21. [PubMed] [Google Scholar] 34.Смирнов Ю.А., Кузнецова М.А., Каверин Н.В. Генетические аспекты образования нитчатых частиц вируса гриппа. Arch Virol. 1991. 118: 279–284. [PubMed] [Google Scholar] 35. Сурьянараяна К., Бачко К., тер Меулен В., Вагнер Р. Подавление транскрипции и другие свойства матричных белков, экспрессируемых генами М, клонированными из вирусов кори и пораженной ткани мозга человека. J Virol. 1994; 68: 1532–1543. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 36. Thoulouze M I, Lafage M, Montano-Hirose J A, Lafon M.Вирус бешенства поражает лимфоциты мышей и человека и вызывает апоптоз. J Virol. 1997; 71: 7372–7380. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37. Звонарьев А.Ю., Гендон Ю.З. Влияние мембранного (M) белка на активность транскриптазы вириона вируса гриппа A in vitro и его чувствительность к римантадину. J Virol. 1980; 33: 583–586. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    Syntrax Matrix Протеиновый порошок с замедленным высвобождением

    ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА

    23 г БЕЛКА — 2 г-6 г УГЛЕВОДОВ — 1.5 г жиров — 0 г аспартама

    • Неденатурированный сывороточный протеин, мицеллярный казеин и яичный альбумин
    • Vital Nutrition для здоровья и восстановления
    • Бариатрический протеин с лучшим вкусом. . . Гарантированно
    • Глютаминовые пептиды
    • Мгновенное смешивание

    СПЕЦИАЛЬНОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ: Бесплатная сумка Syntrax AeroBag при покупке любых продуктов Syntrax на сумму более 99 долларов США. Действительно только при наличии товара!

    ПРОБЛЕМА : Бариатрические протеиновые порошки низкого качества, содержащие мальтодекстрин, вызывающий ожирение, ужасный вкус, требующие блендера для правильного смешивания и содержащие только один очень быстродействующий протеин.Несомненно, что большинство этих продуктов дешевы, но кто хочет изо дня в день заткнуть рот чем-то, что не удобно и не выгодно ???

    РЕШЕНИЕ : протеиновые порошки Syntrax Matrix. На разработку правильной формулы ушли годы, Syntrax Matrix решает все проблемы, с которыми в настоящее время сталкиваются другие низкосортные протеиновые порошки Bariatric. Что наиболее важно, Syntrax полностью избегал дешевых низкокачественных источников белка, таких как денатурированный казеинат натрия и кальция. Syntrax знала, что для того, чтобы быть лучшими, они должны использовать только самые высококачественные источники белка, такие как ультрафильтрованный сывороточный протеин, ультрафильтрованный молочный протеин, нативный яичный альбумин и глютаминовые пептиды.Затраты намного выше, но награда значительна. Эти белки не только имеют прекрасный вкус, но и не имеют себе равных по своей способности улучшать общее состояние здоровья, а также укреплять жизненно важные ткани и процессы организма.

    Компания Syntrax знала, что для производства продукции высочайшего качества в отрасли ей необходимо сделать еще больше. Они решили, что не согласятся ни на что, кроме самого вкусного протеинового порошка на рынке. После бесчисленных испытаний они пришли к нескольким восхитительным вкусам, которые можно употреблять в чистом виде.

    Завершая свое решение проблемы, Matrix тщательно инстанциализирован, так что каждая мерная ложка идеально растворяется в вашем любимом напитке. Больше никаких отвратительных комков или блендеров, которые пачкают вашу кухню. . . с Matrix вам понадобится только ложка!

    ЧТО ТАКОЕ МАТРИЦА?

    Matrix — это смесь белковых концентратов высочайшего качества в отрасли.

    ЧТО ДЕЛАЕТ MATRIX ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННЫМ ПРОДУКТОМ, ЧЕМ КОНКУРЕНЦИЯ?

    Matrix содержит комбинацию следующих трех различных высококачественных белков: сывороточный белок, мицеллярный казеин и яичный альбумин (белок яичного белка).

    ПОЧЕМУ СМЕСЬ РАЗНЫХ БЕЛКОВ ВМЕСТО ОДНОГО БЕЛКА?

    Действительно, существует несколько источников очень высококачественного белка, таких как яйца, казеин и сыворотка; однако ни один из них не идеален во всех аспектах. Все эти источники белка одинаковы с точки зрения общего состояния здоровья и роста мышечной ткани, но у каждого из них есть свои определенные физиологические сильные и слабые стороны. Например, яичный белок считается золотым стандартом источника белка. Он не только идеально поддерживает рост и поддержание мышечной ткани, но и содержит множество факторов роста и микроэлементов.Обратной стороной является то, что это очень дорого. С другой стороны, было показано, что сывороточный протеин является самым быстро метаболизируемым источником протеина и обладает превосходными иммуностимулирующими способностями. Было показано, что казеин является самым медленно метаболизируемым источником белка, что делает его лучшим источником аминокислот в мышечной ткани в течение длительного периода времени. Таким образом, даже несмотря на то, что употребление одного источника белка имеет много преимуществ, в конечном итоге лучший курс действий — это употребление нескольких высококачественных источников белка, чтобы минимизировать слабые места и максимизировать сильные стороны каждого источника.

    КОГДА ЛУЧШЕЕ ВРЕМЯ ПОТРЕБИТЬ МАТРИЦУ?

    Поскольку он содержит белки, которые быстро и медленно метаболизируются, он является идеальным источником белка в любое время дня. Некоторые люди будут употреблять быстродействующий источник протеина, такой как сывороточный протеин, после тренировки и потреблять медленно действующий источник протеина, такой как казеин, перед сном. Поскольку Matrix содержит протеины медленного (казеин), среднего (яичный) и быстрого (сывороточный) действия, он идеально подходит для любой ситуации. Он обладает способностью быстро бомбардировать мышечную массу тела аминокислотами, а также обеспечивать организм теми же питательными веществами в течение длительного периода времени.

    ЯВЛЯЕТСЯ МАТРИЦА ПРЕВОСХОДНЫМ БЕЛКОМ ДЛЯ ЛЮБЫХ С МЕДИЦИНСКИМИ УСЛОВИЯМИ, ТАКИМИ КАК ПАЦИЕНТЫ БАРИАТРИЧЕСКОЙ ХИРУРГИИ?

    Да! Аминокислотный профиль в Matrix — лучший из всех белков на рынке. Кроме того, поскольку он обеспечивает уникальные преимущества трех различных белковых концентратов, он предлагает наилучшие возможности для улучшения общего состояния здоровья и самочувствия. . . от оптимизации безжировой массы тела и уровня жировых отложений до поддержания идеального антиоксидантного статуса и поддержания надлежащего функционирования почек и иммунной системы.

    У нас есть Syntrax Matrix 3-х размеров:

    • Ванны 1 фунт (только Perfect Chocolate и Simply Vanilla)
    • 2-фунтовые ванны
    • Сумки 5 фунтов.
    Доступно с 9 восхитительными сливочными вкусами:
    • Бананы и сливки
    • Печенье и сливки
    • Молочный шоколад
    • Мятное печенье
    • Апельсиновый крем
    • Печенье с арахисовым маслом
    • Идеальный шоколад
    • Просто ваниль
    • Клубничный крем

    Предлагаемое использование:

    Смешайте одну мерную ложку Syntrax Matrix с 8 унциями воды или молока.Тем, у кого меньше потребности в белке, можно запить половину мерной ложки с 4 унциями воды или молока. Обратите внимание на дополнительные калории в сочетании с молоком. Потребляйте Syntrax Matrix два-три раза в день, чтобы удовлетворить ваши потребности в белке. Помните, что лучше всего употреблять протеин сразу после пробуждения утром, после интенсивных физических нагрузок, таких как силовые тренировки, и перед сном. Syntrax Matrix мгновенно смешивается ложкой и имеет прекрасный вкус … ГАРАНТИРОВАНО!

    Рецепты

    Апельсиновый смузи Julius Protein

    Что вам понадобится:

    • 1 мерная ложка Syntrax Matrix Orange Cream Protein Powder
    • 1 чайная ложка ванили
    • 3/4 стакана ванильного миндального молока
    • 3/4 стакана свежевыжатого апельсинового сока
    • 1 чайная ложка апельсиновой цедры
    • 1-2 чашки льда

    Инструкции: Добавьте все ингредиенты в блендер и взбивайте до однородной массы.Украсить дольками апельсина.

    Апельсиновый смузи Creamsicle

    Что вам понадобится:

    • 1/2 стакана апельсинового сока
    • 1/2 стакана миндального молока
    • 1/4 стакана греческого йогурта
    • 1 мерная ложка Syntrax Matrix Orange Cream Protein Powder
    • 1/4 Замороженный спелый банан
    • 1/2 стакана льда

    Инструкции: Добавьте все ингредиенты в блендер и взбивайте до однородной массы. Украсить дольками апельсина.

    Смузи с банановым кремом и кремом

    Что вам понадобится:

    • 8 унций.Ванильное кешью или миндальное молоко
    • 1 большой замороженный спелый банан
    • 6 унций. Ванильный греческий йогурт
    • 1 мерная ложка Syntrax Matrix Bananas & Cream Protein Powder
    • 1 Крекер Грэма (раскрошенный)
    • Корица
    • Горсть льда

    Инструкции: Смешайте все ингредиенты до получения однородной массы. Сверху посыпьте взбитыми кокосовыми сливками и при желании крекерную крошку.

    Клубничные конфеты

    Инструкции: Сделано с протеиновым порошком Syntrax Whey Shake со вкусом клубничного коктейля:

    • Смешайте 1 ¼ стакана теплой воды + 1 ½ стакана сухого молока + 2 столовые ложки предпочитаемого вами подсластителя.
    • Дайте ему постоять несколько часов. Он должен быть очень последовательным.
    • В небольшую кастрюлю добавьте смесь + 2 ложки протеинового порошка Syntrax Whey Shake (клубничный коктейль) + 1 столовую ложку сливочного масла. Перемешивайте, пока смесь не выйдет из сковороды, как в традиционном бригадейро. Зачерпните смесь в маленькие шарики, затем обваляйте шарики в протеиновом порошке Syntrax Whey Shake.
    • Наслаждайтесь!

    Шоколадный мусс для торта

    Инструкции:

    • Смешайте в блендере 3 стакана цельного или обезжиренного молока + 4 ложки Syntrax Nectar Chocolate Truffle или Syntrax Matrix Perfect Chocolate (www.syntrax.com) + 1/2 стакана какао-порошка + 2 чайные ложки стевии + 3 чайные ложки кукурузного крахмала.
    • Взбить в блендере, пока не станет кремом.
    • Готовьте на слабом огне и перемешивайте, пока он не закипит и не загустеет.
    • Заморозить в кастрюле из силикона или нержавеющей стали, смазанной кокосовым маслом, не менее 4 часов. Наслаждаться!

    Банановые биты с арахисовым маслом

    Инструкции:

    • В небольшой посуде разбейте банан и поставьте в микроволновую печь на 40 секунд.
    • Замесите банан до однородной массы.
    • Добавьте 2 мерные ложки Syntrax Matrix Peanut Butter Cookie Whey Protein и хорошо перемешайте. На этом можно остановиться … или, если вы хотите добавить арахисовое масло, смешайте 2 столовые ложки.

    У вас должен получиться густой крем. Заморозьте 20 минут. После замораживания посмотрите, сможете ли вы его свернуть. Будет очень тяжело. Смажьте руки кокосовым маслом и закатайте, иначе они слипнутся. Попав в клубок, обвалять толченые орехи. Наслаждаться!

    Печенье с шоколадной крошкой — с добавлением протеина

    Что вам понадобится:

    • 1 стакан миндальной муки
    • 1 чайная ложка ксантановой камеди
    • 1 чайная ложка соли
    • 1/2 стакана сливочного масла (1 палочка размягчена)
    • 3/4 стакана коричневого сахара (Golden Monk Fruit)
    • 1 чайная ложка ванильного экстракта
    • 1 большое яйцо
    • 1.5 мерных ложек Syntrax Nectar Naturals — Натуральный протеиновый порошок ванили
    • 1 чашка шоколадных чипсов
    • 1/2 стакана нарезанных грецких орехов

    Инструкции: Смешайте все ингредиенты. В зависимости от того, насколько велико ваше печенье, используйте небольшую ложку для печенья или раскатайте 2-3 столовые ложки теста для каждого печенья и равномерно разложите их на противне. Выпекать при температуре 350 градусов 11-13 минут.

    Праздничные пряные протеиновые укусы

    Что вам понадобится:

    • 1.5 чашек овса.
    • 1/4 стакана миндального / орехового масла.
    • 1/4 стакана тертого кокоса без сахара.
    • 1/2 стакана тыквенного пюре.
    • 2 столовые ложки меда.
    • 1/2 чайной ложки ванильного экстракта.
    • 2 ч.л. специй для тыквенного пирога.
    • 1/4 ч. Л. Соли.
    • 1 мерная ложка Syntrax Nectar Naturals — Натуральная ваниль.
    • 1/4 стакана чипсов из темного шоколада.

    Инструкции: Добавьте 1/2 стакана овса в кухонный комбайн и взбивайте, пока он не превратится в овсяную муку.Затем добавьте остальные ингредиенты, кроме шоколадной стружки, и перемешайте. Добавьте шоколадную стружку и несколько раз взбейте, чтобы смесь смешалась, а затем с помощью лопатки для мороженого вычерпайте смесь. Скатайте руками в шарики и храните в герметичном контейнере в холодильнике до недели.

    Мороженое с белком Matrix Mint Chocolate Protein

    Что вам понадобится:

    • 1 мерная ложка Matrix Mint Cookie
    • 1 столовая ложка какао-порошка
    • 1 столовая ложка натурального арахисового масла
    • несладкое миндальное молоко 3/4 стакана
    • 2 ч.л. стевии

    Инструкции: Смешайте и заморозьте на 3 часа.Зачерпните полезное мороженое и наслаждайтесь!

    Пищевая ценность

    Syntrax Matrix 5.0:

    Пищевая ценность

    Syntrax Matrix 2.0:

    Syntrax Matrix 1.0 Пищевая ценность:

    Состав: Белковая смесь (концентрат сывороточного белка, концентрат молочного белка, яичный альбумин, гидролизованный пшеничный глютен), натуральные и искусственные ароматизаторы, соевый лецитин, соль, ацесульфам калия, сукралоза

    Примечание: Фактический вес продукта незначительно отличается в зависимости от вкуса.

    Matrix Nutrition — Дом лучших белков и пищевых добавок, произведенных в Великобритании

    В НАЛИЧИИ

    ОГРАНИЧЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ACT FAST

    КУПИТЬ СЕЙЧАС
    • Анаболический золотой протеиновый порошок

      Протеиновый порошок анаболического золота

      Обычная цена
      от 15,99 фунтов стерлингов

      Цена продажи
      от 15 фунтов стерлингов.99

      Обычная цена
      0,00 фунтов стерлингов

      Цена за единицу
      / за

      распродажа Распроданный

    • Порошок сывороточного протеина Matrix

      Сывороточный матричный протеиновый порошок

      Обычная цена
      от 9 фунтов стерлингов.99

      Цена продажи
      от 9,99 фунтов стерлингов

      Обычная цена
      0,00 фунтов стерлингов

      Цена за единицу
      / за

      распродажа Распроданный

    • Протеиновый порошок Diet Whey Matrix

      Протеиновый порошок Diet Whey Matrix

      Обычная цена
      от 12 фунтов стерлингов.99

      Цена продажи
      от 12,99 фунтов стерлингов

      Обычная цена
      0,00 фунтов стерлингов

      Цена за единицу
      / за

      распродажа Распроданный

    • BCAA таблетки

      Таблетки BCAA

      Обычная цена
      от 7 фунтов стерлингов.99

      Цена продажи
      от 7,99 фунтов стерлингов

      Обычная цена
      9,99 фунтов стерлингов

      Цена за единицу
      / за

      распродажа Распроданный

    Доставлено вовремя.Товар хорошо упакован. Получил именно то, что заказал. Без хлопот.

    Надежный клиент

    Очень хорошо, оперативно, быстро и просто. Я вернусь за белком.

    Надежный клиент

    Да, я буду покупать его снова, лучший диетический сывороточный протеин, который я пробовал.

    Надежный клиент

    Используйте стрелки влево / вправо для навигации по слайд-шоу или смахивайте влево / вправо при использовании мобильного устройства

    .

    Ответить

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *