Ап чаги: АП ЧАГИ ТХЭКВОНДО ВИДЕО уроки: Удар ногой — Ап чаги (Front Kick)

Содержание

СЛОВАРЬ КОРЕЙСКИХ ТЕРМИНОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ТХЭКВОНДО: УДАРЫ НОГАМИ — ТЕОРИЯ И ПРАКТИКА ТХЭКВОНДО — Каталог статей — ГТФ

УДАРЫ НОГАМИ

АП, ЙОП, ДВИТ ЧА ОЛЛИГИ…..

мах ногой вперёд, вбок, назад (используются для разминки, для развития гибкости или для блокирования

МУРУП ЧАГИ……………………..

удар коленом (варианты: ап, оллё, доллё, битуро)

АПЧА БУСИГИ……………………

хлёсткий удар ногой вперёд

ДВИТЧА БУСИГИ………………..

хлёсткий удар ногой назад

ЙОПЧА ЧИРЮГИ………………

удар ногой в сторону (боковой пронзающий удар)

ДВИТЧА ЧИРЮГИ……………..

удар ногой назад

ДВИТЧА МИЛКГИ……………….

толкающий удар назад

ДОЛЬО ЧАГИ…………………….

круговой удар

БАНДЭ ДОЛЬО ЧАГИ…………..

обратный круговой удар

КЫРЫ ЧАГИ……………………..

удар с захлёстом голени

НЭРИО ЧАГИ…………………….

удар сверху вниз (ануро-, вовнутрь, бакуро-наружу)

СЕВО ЧАГИ………………………

вертикальный удар

БИТУРО ЧАГИ………………….

удар со скручиванием

ИЛЬБО ЧАГИ…………………..

удар с подшагом

ИБО ЧАГИ………………………

удар с зашагом

ТВИМИО ЧАГИ………………….

удар в прыжке

И ДЖУНГ ЧАГИ…………………

два удара ногой

САМ ДЖУНГ ЧАГИ……………..

три удара ногой

ХОНАП ЧАГИ…………………….

комбинированный удар ногой

ЁНСОК ЧАГИ……………………

последовательные удары ногами

ДОЛЬМИО ЧАГИ (ТОРА ЧАГИ)

удар с разворотом

ЙОП ЧА МОМЧИГИ……………

контролирующий удар ногой ребром стопы

АП ЧА МОМЧИГИ………………

контролирующий удар ногой подушечкой под пальцами

ЧА МОМЧИГИ………………….

контролирующий удар ногой

БАНДАЛ ЧАГИ………………….

дугообразный удар

БАДА ЧАГИ………………………

контратакующий удар ногой

ТВИМИО НОМО ЧАГИ………..

удар ногой в прыжке вдаль

ТВИМИО НОПИ ЧАГИ………..

удар ногой в прыжке вверх

ТВИМИО СА БАНГ ЧАГИ…….

удары ногами в прыжке в четыре направления

ТВИМИО САМ БАНГ ЧАГИ….

удары ногами в прыжке в три направления

ТВИМИО САМ ДЗУНГ ЧАГИ….

три удара ногой в прыжке

ТВИМИО САМ ДЗУНГ СУДЖИК ЧАГИ………………….

три удара ногой в прыжке вертикально

ТВИМИО САМ ДЗУНГ СУПЬЁНГ ЧАГИ………………….

три удара ногой в прыжке горизонтально

ТВИМИО СУДЖИК И ДЖУНГ ЧАГИ…………………………………….

два удара ногой в прыжке вертикально

ТВИМИО СУПЬЕНГ И ДЖУНГ ЧАГИ………………………………..

два удара ногой в прыжке горизонтально

ТВИМИО И ДЖУНГ ЧАГИ……..

два удара ногой в прыжке

ТВИМИО ЮП БИТУРО ЧАГИ…

удар в прыжке одна нога бьёт в бок другая выполняет удар со скручиванием

ТВИМИО АПДВИ ЧАГИ………

переднезадний удар в прыжке

ТВИМИО САНГБАНГ ЧАГИ…

двойной удар ногами в прыжке в два направления

ТВИМИО САНГ БАЛ ЧАГИ…….

двойной удар в прыжке (варианты: ап, юп, доллё, нопи)

ТВИМИО САНГ БАЛ АП ЧА МОЧИГИ…………………………..

двойной контролирующий удар в прыжке

ТВИМИО КАВИ ЧАГИ…………

ножницеобразный удар в прыжке

ТВИМИО РАСОНСИК ЧАГИ….

спиралеобразный удар в прыжке

БАЛ ДУЛГИ………………………

поднятие ноги (с целю защиты от удара по ноге)

БАЛ ГОЛГИ………………………..

подсечка

БУДЖАПГО ЧАГИ……………….

удар ногой с одновременным захватом руками другого противника

ГОЛЧЁ ЧАГИ……………………..

накладывающий блок ногой

ДЖОМА ЧАГИ…………………..

кувырковый удар (варианты: ап кумчи, двит чук)

ДОРО ЧАГИ………………………..

отмахивающий удар (используется для защиты паха, голени и лодыжки или для атаки лодыжки противника)

ГОКЕНГ И ЧАГИ…………………

пикообразный удар

НУЛО ЧАГИ……………………..

давящий удар

НУЛО ЧАГИ АНУРО…………..

давящий удар с наружи вовнутрь

НУЛО ЧАГИ БАКУРО…………..

давящий удар из нутрии наружу

БАНСА ЧАГИ……………………..

отталкивающий удар (выполняется после отталкивания от стены другого противника и т.д.)

ЧА БАПГИ…………………………

топчущий удар

ДЖИГО ЧАГИ…………………….

прямой удар

СИРО ЧАГИ………………………

подметающий удар

Удары и Блоки

Удары руками

В тхэквондо удары руками исполняются на короткой дистанции — стоя, в прыжке, в крутящемся положении или в нападении. Нанесённые быстро по отдельности, или в комбинациях, они могут вывести соперника на некоторое время из оборонительной позиции и сделать его уязвимым. Их можно разделить на два типа:

Удары кулаком:

  • чон-гвон
    — удар согнутыми указательным и средним пальцами.
  • чон-гвон чиреуги — удар кулаком вперёд.
  • сан-гвон чиреуги — удар обоими кулаками одновременно.
  • тычибо чиреуги — перевёрнутый удар кулаком.
  • сево чиреуги — удар кулаком снизу вверх.
  • умджи — удар кулаком с выпирающим большим пальцем.

Удары открытой рукой:

  • судо ёп тхэриги — удар ребром ладони со стороны.
  • риквон тхэриги — удар обратной стороной кулака.
  • судо ануро тхэриги — удар ребром ладони вовнутрь.
  • сонкаль — нанесение удара открытой ладонью сверху вниз.
  • чоумук — нажатие пальцев на болевые точки.
  • ап палькуп тхэриги — параллельный удар локтем.

Удары ногами
  • тимио-ап-чаги — прямой удар ногой в воздухе
  • ап-чаги — удар мыском заднестоящей ноги в уровень живота, также при хорошей растяжке наносится в голову.
  • долио-чаги — боковой удар передней/задней ногой наносится подъемом стопы.
  • момдоллё-чаги — удар наском переднестоящей ногой выполняется с разворотом на 360 градусов через спину, наносится как в туловище так и в голову.
  • ти-чаги — удар плоскостью стопы производится заднестоящей ногой с разворотом через спину, мысок должен смотреть вниз.
  • миро-чаги — удар плоскостью стопы заднестоящей ногой проводится в корпус, похож на толчок.
  • ху-рио-чаги — удар с разворотом через спину, проводится в голову пяткой, мысок смотрит в сторону противоположную направлению удара.
  • нэрё-чаги — производится замах ноги на уровень головы или выше и производится резкий удар сверху вниз в корпус или голову пяткой, мысок смотрит вверх.

Ануро и бакуро — направление замаха ноги снаружи или изнутри соответственно.

  • куасоге-йопчхаги — стойка во время удара не меняется, производится зашаг задней ноги за переднюю сзади, затем бьёт передняя нога, удар производится полной плоскостью стопы в район туловища или головы, мысок смотрит параллельно полу.

Приставка «твио-» означает, что удар производится в прыжке.

  • твиодолё-чаги — вынос задней ноги и затем резкий удар и перескок на другую ногу, всё делается в прыжке, сам удар получается в воздухе.
  • твионэрё-чаги — вынос задней ноги как можно выше и производится удар нерё в голову.

Приставка «твитула-» также означает, что перед ударом будет вынос задней ноги, однако данные удары выполнить может только человек, хорошо владеющий своим телом, имеющий хорошую координацию и технику, данные удары выполняют в основном мастера и кандидаты в мастера спорта, а также при сдаче на 1-й дан чёрный пояс.

  • твимё-твит-чаги — вынос задней ноги разворот на 180 градусов, затем производится удар твит в голову или корпус, во время удара делается полный оборот вокруг своей оси, вынос ноги производится резко и само вращение и удар происходят в воздухе.
  • твимё-хурё-чаги — вынос задней ноги, разворот и удар хурё в голову, полный разворот с ударом получается на 540 градусов, удар достаточно сложный, перед его выполнением спортсмены должны выполнить комплекс упражнений на разогрев мышц и связок всего тела. Перед тем как выполнять удар, необходимо убедиться, что мышцы, суставы и связки тазобедренной области, ног и поясницы хорошо разогреты и растянуты.

Блоки

Блоки ставятся руками, коленями и ногами, чтобы отбить удары противника. Чтобы начать блок, нужно предвидеть вид и направление его атаки. Первое, что необходимо запомнить для изучения основных блоков и их применения, это то, что рука, блокирующая атаку противника, должна начинать свое движение почти одновременно с движением его руки или ноги.

  • ан пальмок ёпмаки — блок внутренней стороной руки
  • баккат пальмок хадан маки — сметающий блок
  • баккат пальмок чукьё маки — восходящий блок
  • сань баккат пальмок маки — блок двумя кистями
  • баккат пальмок заньдан маки — блок сверху
  • баккат пальмок хэчьё маки — блок клином
  • ан пальмок дольё маки — круговой блок внутренней стороной руки
  • сань зудо маки — рубящий блок ребром ладони
  • пальмок даэби маки — защитный блок рукой
  • зудо даэби маки — защитный блок ребром ладони
  • ан мурёп маки — блок коленом вовнутрь
  • баккат мурёп маки — блок коленом в сторону
  • пакат маки — блок рукой защищающея плечо

Аттестации


Программа аттестации тхэквондо (ВТ)


10 гып. На бело-желтый пояс.

1.Нормы по О.Ф.П.


возраст

5-6 лет

Мальчики-девочки

7-8 лет

Мальчики-девочки

9-12 лет

Мальчики-девочки

13 лет и старше

Мальчики-девочки

отжимание

5 — 3

7-5

15 -10

20-12

Упр. на пресс.

7-5

10–7

15-10

30-20

Упр. на гибкость

(шпагат, мостик, складка на коленях)

+

+

+

+

2. Стойки:

Чарёт (стойка смирно),

Ап соги (боевая стойка),

Джучум-соги (стойка всадника),                                            

Наре соги (фронтальная стойка, ноги чуть уже ширины плеч).

Мурып андя (сесть на колени)

Пёнэ андя (сесть, скрестив ноги)

3. Удары руками:

Ханбон Момтом тчириги (один удар кулаком вперед)

Тубон момтом тчириги (два удара на один счет)

Себон момтом тчириги (три удара на один счет)

4. Макки (Блоки):

Ольгуль Макки (блок  головы),

Момтом Ан Макки (блок корпуса),

Арэ Макки (блок нижней части туловища)

5.Пальчаги (удары ногами):

Ап чаги (удар от колена, вперед)                     Олё ан чаги (круговой мах ногой вовнутрь),

Миро чаги (толчок ногой от себя вперед),

Олё  чаги (махи прямой ногой)                        Олё паккат чаги (круговой мах ногой изнутри).

7.Теория (вопрос — ответ):

Клятва спортсмена. Значение белого пояса. Терминология: перевод слово «Тхэквондо», название униформы и пояса тхэквондо. Название клуба, столица России, столица Южной Кореи, счёт, имя тренера.

                                  

                                                   


9 гып. На желтый пояс.

1.Нормы по О.Ф.П.


возраст

5-6 лет

Мальчики-девочки

7-8 лет

Мальчики-девочки

9-12 лет

Мальчики-девочки

13 лет и старше

Мальчики-девочки

отжимание

6 — 5

8-6

17 -12

25-15

Упр. на пресс.

8-6

15–10

20-15

30-25

Упр. на гибкость

(шпагат, мостик, складка на коленях)

+

+

+

+

                                              1.Стойки:

Чарёт (стойка смирно),                                                Мурып андя (сесть на колени)

Ап соги (боевая стойка),                                              Пёнэ андя (сесть, скрестив ноги)

Джучум-соги (стойка всадника),                                  Ап Куби (глубокая стойка).                                

Наре соги (фронтальная стойка, ноги чуть уже ширины плеч).

   

2. Удары руками:

Момтом тчириги (один удар кулаком вперед),

Тубон момтом тчириги (два удара на один счет),

Себон момтом тчириги (три удара на один счет),

Сонналь тчириги (удар ребром ладони).

3. Макки (Блоки):

Ольгуль Макки (блок  головы), 

Момтом Ан Макки (блок корпуса),

Арэ Макки (блок нижней части туловища),

Момтом Пакат Макки (блок тыльной стороной руки).

4. Пхумсе (технический комплекс):

Тэгук Иль джан (выполняется под счет).

5.Пальчаги (удары ногами):

Ап чаги (удар от колена, вперед),                            Олё ан чаги (круговой мах ногой вовнутрь),

Миро чаги (толчок ногой от себя вперед),               Олё чаги (махи прямой ногой),  

Тулё Чаги (боковой удар),                                        Олё паккат чаги (круговой мах ногой изнутри),

Гидан Ап чаги (удар вперед в прыжке со сменой ног).

6.Теория (вопрос — ответ):

Клятва спортсмена. Значение белого и желтого пояса. Терминология: перевод слово «Тхэквондо», название униформы и пояса тхэквондо. Название клуба, столица России, столица Южной Кореи, счёт, имя тренера. Этикет Тхэквондо во время занятий. Значение поклона. Где находиться центр Всемирного тхэквондо.

   


8 гып.  На желто — зеленый пояс.

1.   Нормы по О.Ф.П.


возраст

6-9 лет

Мальчики-девочки

10-13 лет

Мальчики-девочки

14 и старше

Мальчики-девочки

отжимание (на ладонях, кулаках)

15-10

25-15

40

Упр.на пресс.

15-10

30-20

40

Шпагат (поперечный, продольный правый, левый)

+

+

+

2. Стойки:

Ап соги (боевая стойка),                                               Чарёт (стойка смирно),

Джучум-соги (стойка всадника),                                 Ап куби (глубокая стойка).    

Наре соги (фронтальная стойка, ноги чуть уже ширины плеч), 

Тит куби (блок Хан Сонналь Макки)                          Мурып андя (сесть на колени)

Пёнэ андя (сесть, скрестив ноги)

3. Блоки и удары руками:

Кибон Дунжак Чедяри (базовый комплекс из 30 движений, в стойке джучумсоги).

4. Паль чаги (удары ногами):

В стойке Ап Соги:

Ап чаги (удар от колена, вперед),                                       Аппаль Тулё  Чаги,

Тулё чаги (боковой удар),                                                   Ольгуль тулё чаги,

Миро чаги (толчок ногой от себя вперед),                        Парымпаль Тулё чаги,

Олё чаги + круговые махи,                                                  Гидан ап чаги.

5. Удары по лапам:

Парымпаль тулё чаги,                                                      Наре чаги,

Ольгуль тулё чаги,                                                            Аппаль Тулё Чаги (отскок),

Тулё Чаги (задней ногой, передней ногой в корпус, в голову)

6. Пхумсе (технический комплекс):

Тэгук Иль джан, Тэгук И джан (2-е выполняется под счёт)

7. Сибом (показательные номера):

Гидан ап чаги (удар по лапе в высоту с разбега)

8. Теория:

Клятва спортсмена. Значение белого, желтого и зеленого поясов. Терминология: перевод слово «Тхэквондо», название униформы и пояса тхэквондо. Название клуба, столица России, столица Кореи, счёт, имя тренера. Этикет Тхэквондо во время соревнований (выход на даянг, поклон своему тренеру и тренеру соперника, сопернику. После поединка, подойти к тренеру соперника, поклон пожать руку. Нельзя вести себя слишком эмоционально, бережно относиться к инвентарю).  Где находиться центр Всемирного тхэквондо. Техника завязывания пояса.

   


7 гып.   На зеленый пояс.

1.   Нормы по О.Ф.П.


возраст

6-9 лет

Мальчики-девочки

10-13 лет

Мальчики-девочки

14 и старше

Мальчики-девочки

отжимание (на ладонях, кулаках)

17-12

27-17

40

Упр.на пресс.

25-20

35-25

40

Шпагат (поперечный, продольный правый, левый)

+

+

+

2.   Стойки.

Ап соги (боевая стойка),                             Джучум-соги (стойка всадника),

Чарет (стойка смирно),                               Тит куби (блок Хан Сонналь Макки),            

Наре соги (фронтальная стойка, ноги чуть уже ширины плеч),

Ап куби (глубокая стойка).                          Мурып андя (сесть на колени)

Пёнэ андя (сесть, скрестив ноги)

3.    Блоки и удары руками.

 Кибон – дунжак чедяри (базовый комплекс из 30 движений, в стойке джучумсоги).

4.    Паль чаги (Удары ног)

Ап чаги (удар от колена, вперед),                           Тулё чаги (боковой удар),

Миро чаги (толчок ногой от себя вперед),            Нэрё чаги + круговые махи,

Парымпаль тулё чаги,                                            Ольгуль тулё чаги,

Апаль Ан тулё чаги,                                                Мом том тулё чаги  в корпус, в голову,                             

Мом том ёп чаги (удар в бок пяткой).

5.    Удары по лапам (в движение)

 Серии из двух, трех ударов ногами.

6.    Сибом:

Удар Гидан ап чаги с разбега в высоту.

Удар Ёп чаги в длину 3-5 человек.

7.    Пхумсе:

Тэгук иль джан, Тэгук и джан, Тэгук Сам джан.

8.    Теория:

 Клятва спортсмена. Значение зеленого цвета пояса.  Перевод слово «Тхэквондо», название униформы и пояса тхэквондо. Название клуба, столица России, столица Кореи, счёт, имя тренера. Где находиться центр Всемирного тхэквондо. История Всемирного Тхэквондо. Этикет Тхэквондо во время соревнований (выход на даянг, поклон своему тренеру и тренеру соперника, сопернику. После поединка, подойти к тренеру соперника, поклон, пожать руку. Нельзя вести себя слишком эмоционально, бережно относиться к инвентарю).  За что дают 1,2,3,4,5 балла (ов) в Тхэквондо во время спарринга, перечисли? За что делают замечания в спарринге? Что такое Куккивон? — Числительные в Корейском языке: 1-й (иль), 2-й (и), 3-й (сам), 4-й (са), 5-й (о), 6-й (юк), 7-й (чхиль), 8-й (пхаль), 9-й (ку), 10-й (щип).   

   


6 гып.    На зелено-синий пояс.

1.    Нормы по О.Ф.П.


возраст

6-9 лет

Мальчики-девочки

10-13 лет

Мальчики-девочки

14 и старше

Мальчики-девочки

отжимание (на ладонях, кулаках, запястьях, пальцах)

20-15

30–20

45

Упр. на пресс. (книжкой)

30-20

35-25

40

Шпагат (поперечный, продольный правый, левый)

+

+

+

2.    Стойки.

Ап соги (боевая стойка),                                                      Чарёт (стойка смирно),

Джучум-соги (стойка всадника),                                         Хакдори соги,   

Наре соги (фронтальная стойка, ноги чуть уже ширины плеч), 

Пёнэ андя (сесть, скрестив ноги)                                        Мурып андя (сесть на колени)

Тит куби (блок Хан Сонналь Макки),             

 Пом соги (стойка короче Ап соги и немного присесть, пятку передней ноги приподнять Арэ Макки)

3 . Блоки и удары руками

 Кибон – дунжак чедяри (базовый комплекс из 30 движений, в стойке джучум-соги).

4.    Удары ногами ( Паль чаги)

Ап чаги (удар от колена, вперед),                                       Тулё чаги (сбоку),

Миро чаги (толчок ногой от себя вперед),                        Нэрё чаги + круговые махи,

Парымпаль Тулё чаги,                                                        Ольгуль тулё чаги,

Гидан ап чаги (с разбегу высоту),                                      Ёп чаги,

Мом дольё тулё чаги,                                                          Ти чаги.

5.    Удары по лапам (в движение):

Кируги (спарринг по лапам)

6.    Пхумсе:

Тэгук иль джан, Тэгук и джан, Тэгук Сам джан.

7.     Сибом:

Удар Ёп чаги в высоту через согнувшего партнера.

Удар Ёп чаги в длину 3-6 человек.

Удар в прыжке Тулё чаги, оттолкнувшись от опоры.

8.    Кёруги:

Спарринг без амуниции, легкий контакт. Показать правильные атаки, контратаки.

9.    Теория:

Клятва спортсмена. Значение синего пояса. Перевод слово «Тхэквондо», название униформы и пояса тхэквондо. Название клуба, столица России, столица Кореи, счёт, имя тренера. Где находиться центр Всемирного тхэквондо. История Всемирного Тхэквондо. Этикет Тхэквондо во время соревнований (выход на даянг, поклон своему тренеру и тренеру соперника, сопернику. После поединка, подойти к тренеру соперника, поклон, пожать руку. Нельзя вести себя слишком эмоционально, бережно относиться к инвентарю).  За что дают 1,2,3,4,5 балла (ов) в Тхэквондо во время спарринга, перечисли? За что делают замечания в спарринге? Что такое Куккивон? — Числительные в Корейском языке: 1-й (иль), 2-й (и), 3-й (сам), 4-й (са), 5-й (о), 6-й (юк), 7-й (чхиль), 8-й (пхаль), 9-й (ку), 10-й (щип).  Правила соревнований.  Судейские жесты в спарринге.

   


5 гып.  На синий пояс.

1.   Нормы по О.Ф.П.


возраст

6-9 лет

Мальчики-девочки

10-13 лет

Мальчики-девочки

14 и старше

Мальчики-девочки

отжимание (на ладонях, кулаках, запястьях, пальцах)

25-10

35–25

40

Упр. на пресс (книжкой)

35-25

40-35

40

Шпагат (поперечный, продольный правый, левый)

+

+

+

2.    Стойки.

Ап соги (боевая стойка),                                                      Джучум-соги (стойка всадника),

Наре соги (фронтальная стойка, ноги чуть уже ширины плеч),

Чарёт (стойка смирно),                                                        Хакдори соги,

Тит куби (блок Хан Сонналь Макки),                                Мурып андя (сесть на колени)

Пом соги  (стойка короче Ап соги и немного присесть, пятку передней ноги приподнять Арэ Макки),

Коа соги (стойка из 5 пхумсэ, крестовая стойка).             Пёнэ андя (сесть, скрестив ноги)                                              

3.    Блоки и удары руками.

Кибон – дунжак чедяри (базовый комплекс из 30 движений, в стойке джучумсоги).

4.    Удары ногами (Паль чаги)

Ап чаги (удар от колена прямо вперед),                           Тулё чаги,

Миро чаги (толчок ногой от себя вперед),                       Нэрё чаги + круговые махи,

Парынпаль Тулё чаги,                                                       Гидан ап чаги (с разбегу высоту),

Ольгуль тулё чаги,                                                             Мом дольё тулё чаги,

Ёп чаги, Ти чаги,                                                                Ан тулё чаги.

Серии даров в воздух (удары с разворота 2-3 удара в атаке).

5.    Удары по лапам (в движение)

Сложные серии ударов, Кёруги (спарринг по лапам)

6.    Пхумсе:

Тэгук иль джан, Тэгук и джан, Тэгук Сам джан, Тэгук Са джан, Тэгук О джан (1,2,3,4,5-е).

7.     Сибом:

Удар Ёп чаги в длину 4-7 человек. Удар Ёп чаги в высоту через согнувшего партнера.

Удар в прыжке Тулё чаги, оттолкнувшись от опоры.

8.    Кёруги (спарринг):

Техика и тактика ведения спарринга. (в полной амуниции)

    

9.     Кьёкпа (разбивание):

Джумук чириги и удар ногой (тулё чаги).

   

10.Теория:

Клятва спортсмена. Значение синего пояса. Перевод слово «Тхэквондо», название униформы и пояса тхэквондо. Название клуба, столица России, столица Кореи, счёт, имя тренера. Где находиться центр Всемирного тхэквондо. История Всемирного Тхэквондо. Этикет Тхэквондо во время соревнований (выход на даянг, поклон своему тренеру и тренеру соперника, сопернику. После поединка, подойти к тренеру соперника, поклон, пожать руку. Нельзя вести себя слишком эмоционально, бережно относиться к инвентарю).  За что дают 1,2,3,4,5 балла (ов) в Тхэквондо во время спарринга, перечисли? За что делают замечания в спарринге? Что такое Куккивон? — Числительные в Корейском языке: 1-й (иль), 2-й (и), 3-й (сам), 4-й (са), 5-й (о), 6-й (юк), 7-й (чхиль), 8-й (пхаль), 9-й (ку), 10-й (щип). Правила соревнований.  Судейские жесты в спарринге. Гимн России.

Терминология Тхэквондо для начинающих: термины и слова

Основные команды:

  • чариот — смирно
  • кюнне — поклон
  • джунби — приготовиться
  • си джак — начать
  • баль бако — смена стойки
  • тиро дора — смена направления на 1800
  • маё — построились
  • кальо — остановились
  • кэсок — продолжили
  • кыман, баро — стоп, закончили
  • щёт — вольно
  • хэчо — разошлись
  • гё дэ — смена

Основные стойки:

  • соги — стойка
  • наранхи соги — параллельная стойка (короткая)
  • пёнхи соги — свободная стойка (короткая)
  • чучум соги — параллельная стойка (всадника)
  • ап куби — передняя длинная стойка
  • ап соги — передняя короткая стойка
  • двит куби — задняя длинная стойка
  • бом соги — стойка тигра
  • коа соги — передняя «скрещенная» стойка

Уровни и направления ударов и блоков:

  • ольгуль — верхний (лицо, шея)
  • момтом — средний (грудь, живот)
  • арэ — нижний (низ живота)
  • ап — вперед
  • йоп — в сторону
  • двит — назад
  • нэрё — вниз
  • вен — левый
  • орун — правый

Основные блоки:

  • макки — блок, защита
  • ан — снаружи (внутрь)
  • бакат — изнутри (наружу)
  • арэ макки — блок нижнего уровня
  • арэ хечьо макки — двойной блок нижнего уровня
  • момтон ан макки – блок среднего уровня снаружи во внутрь
  • момтон бакат макки — блок среднего уровня наружу
  • ольгуль — блок верхнего уровня
  • хэчо — разводящий
  • гави макки — блок «ножницы»
  • отгоро — скрестный
  • дэби — двойной
  • хан — одной конечностью
  • ян — двумя конечностями
  • годуро макки — усиленный блок
  • нулло макки — блок основанием ладони сверху вниз
  • сантуль макки — блок в форме «горы»

Основные удары:

  • джируги — удар кулаком
  • дун джумок — удар тыльной стороной кулака сверху
  • чаги — удар ногой
  • нерьо чаги — удар ногой сверху
  • ап чаги — удар ногой вперёд
  • юп чаги — удар ногой вбок
  • дольо чаги — хлесткий удар по окружности сбоку
  • ток чиги — удар открытой ладонью
  • сонналь мок чиги — рубящий удар ребром ладони в область шеи
  • меджумок — кулак-молот
  • баро — разноименной рукой
  • бандэ — одноименной рукой
  • ап оллиги — мах ногой вперед
  • хурё чаги — хлесткий обратный удар
  • миро чаги — толчковый удар стопой
  • ти хуриги, момдольо чаги — хлесткий обратный удар ногой по окружности с разворотом на 3600
  • бандэ дольо чаги — обратный удар прямой ногой по окружности с разворотом на 3600
  • двит чаги — проникающий удар ногой назад
  • двидора йоп чаги — боковой удар ногой с разворота
  • твио чаги — удар ногой в прыжке
  • сэво ан чаги — сметающий удар стопой снаружи внутрь
  • тубальдан сон дольо чаги — «двойка» ногами
  • сонгут чируги — удар кончиками пальцев
  • тын джумок чируги — удар перевернутым кулаком
  • сонналь чиги — удар ребром ладони
  • тон дольо чаги — хлесткий удар по окружности с разворота

Основные стэпы:

  • пумпакко — смена стойки
  • паджета — скольжение назад
  • парын карим — шаг вперед
  • чаки пэта — шаг назад

Части тела:

  • паль — рука
  • палькуп — локоть
  • пальмок — предплечье
  • муруп — колено
  • чук — стопа
  • ап чук — передняя часть стопы, кошачья стопа
  • двит чук — пятка, нижняя часть стопы
  • ап джумок — передняя часть кулака
  • тын джумок — тыльная часть кулака
  • сонналь — ребро ладони
  • сонкут — кончики пальцев
  • бальналь — ребро стопы
  • бальбадан — внутренняя часть стопы
  • бальдан — подъем стопы
  • батансон — открытая ладонь
  • пьон джумок — «плоский» кулак

Основные термины:

  • аньо хашимника — здравствуйте
  • хамсамнида — спасибо
  • ан — вовнутрь
  • бакат — наружу
  • ап — вперед
  • двит — назад
  • толио — сбоку
  • юп — вбок
  • нэрио — сверху
  • до — путь
  • ки — энергия
  • кихап — концентрированный боевой выкрик
  • сабум — инструктор с черным поясом
  • сабум ним — инструктор с 4 даном и выше, мастер, учитель
  • кьо сах ним — инструктор с цветным поясом
  • твио — прыгать
  • хечьо — клин, раздвигать
  • суль — искусство
  • керуги — поединок
  • джаю — свободный
  • ти — пояс
  • самбон — тройной
  • дубон — двойной
  • самбон керуги — трехшаговый базовый спарринг
  • ибон керуги — двухшаговый базовый спарринг
  • ханбон керуги — одношаговый базовый спарринг
  • хосинсуль — самооборона
  • пумсэ — формальный комплекс упражнений, форма движения
  • кьок па — испытание силы удара путем разбивания предметов
  • добок — костюм бойца тхэквондо
  • доджан — зал для занятий тхэквондо
  • кибон — базовая техника
  • дончжак — движения
  • часэ — стойки
  • кисул — техника
  • хогу — протектор (жилет)
  • додянг — место занятий
  • ханбон — один шаг
  • тэгук — «высший предел», название ученических пумсэ
  • кёнго — предупреждение
  • гамджом — штрафное очко
  • чон — синий
  • хон — красный
  • дан — мастерская степень
  • пум — детская мастерская степень
  • гып — ученическая степень

Числительные:

Количественные. Сколько?

  1. Хана – один
  2. Туль – два
  3. Сэт – три
  4. Нэт – четыре
  5. Дасот – пять
  6. Ёсот – шесть
  7. Ильгоп – семь
  8. Ёдоль – восемь
  9. Ахоп – девять
  10. Ёль – десять

Порядковые. Какой?

  1. Иль – первый
  2. И – второй
  3. Сам – третий
  4. Са – четвертый
  5. О – пятый
  6. Юк – шестой
  7. Чиль – седьмой
  8. Пхаль – восьмой
  9. Ку – девятый
  10. Сип — десятый

СЛОВАРЬ ТХЕКВОНДО — tkd.desantura.de

Корейские названия Латиница
Русские названия
Киосаним Kyosanim, 교사님 (kor.)
Тренер, уровень с 1 по 3 Дан
Сабум Sabom, 사범 (kor.)
Учитель 4.Дан, Мастер 5. Dan
Сабомним Sabomnim, 사범님 (kor.)
 Грандмастер с 6 Дана
Сонбае Ним Sonbae Nim Старший ученик
Суоронсенг Suyronseng Ученик, Ученица
Пум Poom Уровень мастеров до 16 лет
 Доджанг Dojang Зал для занятий
 Че Юк Кван Che Yuk Kwan Спортивная школа, Клуб
 Гып Kup Ученический уровень
 Дан Dan Уровень мастеров
А Нёнг Ха Се (г-глухое)  A Nöng Ha Se Здравствуйте
Ан Ёнг Хи Ке Сэё
 An Eong Hi Ke Sae До свидания, (г глухое)
Камса Хамнида
 Kamsa Hamnida Спасибо, учитель, за тренировку
Кугки Дае Хио Кёнэ Kukiae Dae Hiyo Kyongye Покланиться флагу
Куг Ки Э Дэ Хан
 Kug Ki E De Han Повернуться к флагу
Джуль Djul Шеренга
Чарёт
Charyeot, 차렷 (kor.)
Смирно
Кёнэ Kyongye 경례 (kor.) Поклон
Мурып Куро Кёнэ
 Murup Kuro Kyongye Поклон на коленях
Хэчё Моё Hecheo Moeo Стройся,
Хэчё Hecheo Разойтись
Ан Джя  An Dja Сесть
Иросот
 Irosot Встать
Бон Уи Чи
 Bon Ui Chi Обратно на место
Пумпако
 Pumpako Смена позиций
Гё Дэ
 Gö De Смена (задания)
 Добок данжонг Dobok danjong Превести форму в порядок
 Паро/Роо Paro / Roo  В исходное положение
 Чуи Shyü Раслабиться
 Пхумсе Pumse / Poomsae Формальные комплексы
 Пьоджок Pyojok Цель
 Момдольо Momdollyo Поворот корпуса
 Кёруги Kyorugi Вольный спаринг
Унгё Ungeo Атака (атакующий)
Мано
 Mano Защита (защищающийся)
 Кеёк-Па Kyok-Pa Разбивание предметов
 Орын Oreun Право (правосторонний)
Ойен Oen Лево (левосторонний)
 Опо Opo Горизонтальный
 Сэво Sewo Вертикальный
 Добок Dobok Форма для тхеквондо
Ха-И Ha-I Штаны
Санг-И Sang-I Куртка
 Ти Ty  Пояс
 Хогу Hogu  Защитный жилет
Мори Боходэ  Mori Bohode Шлем
Дари Боходэ  Dari Bohode Шитки на голень
Пхаль Боходе  Pchal Bohode Шитки на предплечье
Нам Сон Боходе Nam Son Bohode Бандаж, защищающий пах
 Яанг Jang Aufgabe, Abschnitt

Аттестация 8-9 ГЫП — Спортивный клуб «Держава»

Краткое содержание технического раздела для самостоятельного повторения дома (бело-желтый и желтый пояс).

9 гып — бело-желтый пояс 

1. Из стойки «ап соги» -короткая стойка «шаг»:

  • «ап чаги»  — удар ногой вперед,
  • «дольо чаги»  — удар ногой сбоку,
  • «нерьо чаги» — удар ногой сверху вниз

(каждый удар выполняем 5-6 раз, затем делаем смену ног и повторяем с другой ноги).

2. По команде «чучун соги, джуби» левой ногой выходим в стойку «чучун соги — стойка всадника». Руки на реверс, локти плотно прижаты. Стопы и колени в стойке смотрят строго вперед. Далее по команде «момтон джируги» — удары кулаком в корпус, выносим правую руку на удар вперед кулаком в корпус. Затем под счет 10 ударов в корпус, 10 ударов «ольгуль джируги» — вперед кулаком в голову, 10 ударов «арэ джируги» — вперед кулаком в нижнюю часть. По команде «кыман» — закончили, подтягиваем левую ногу и встаем прямо.

3. Из стойки «ап соги» — короткая стойка «шаг»:

  • блок «арэ маки» — нижний блок,
  • блок «момтон ан маки» — средний блок снаружи во внутрь,
  • блок «ольгуль маки» — верхний блок

(каждый блок по 5-6 раз, затем меняем стойку и повторяем другой рукой. Следим чтобы рука выполняющая блок соответствовала передней ноге….»впереди правая нога, значит блок выполняем правой рукой»)

4. Выполняем стойку «ап куби» — длинная стойка с опорой на переднюю ногу (ширина стойки примерно ширина плеч, задняя нога прямая, пятку не отрываем от пола, колено передней согнутой ноги над носком). Левая нога на месте, правая назад.  2-3 шага вперед из стойки, затем назад.

8 гып — желтый пояс

1. Из стойки «ап соги» -короткая стойка «шаг»:

  • «ап чаги» — удар ногой вперед,
  • «дольо чаги» — удар ногой сбоку,
  • «иоп чаги» — удар ногой в сторону ребром стопы,
  • «нерьо чаги» — удар ногой сверху вниз

(каждый удар выполняем 5-6 раз, затем делаем смену ног и повторяем с другой ноги).

2. По команде «чучун соги, джуби» левой ногой выходим в стойку «чучун соги — стойка всадника». Руки на реверс, локти плотно прижаты. Стопы и колени в стойке смотрят строго вперед. Далее по команде «момтон джируги» — удары кулаком в корпус, выносим правую руку на удар вперед кулаком в корпус. Затем под счет 10 ударов в корпус, 10 ударов «ольгуль джируги» — вперед кулаком в голову, 10 ударов «арэ джируги» — вперед кулаком в нижнюю часть. По команде «кыман» — закончили, подтягиваем левую ногу и встаем прямо.

3. Из стойки «ап соги» — короткая стойка «шаг»:

  • блок «арэ маки» — нижний блок,
  • блок «момтон ан маки» — средний блок снаружи во внутрь,
  • блок «ольгуль маки» — верхний блок

(каждый блок по 5-6 раз, затем меняем стойку и повторяем другой рукой. Следим чтобы рука выполняющая блок соответствовала передней ноге….»впереди правая нога, значит блок выполняем правой рукой»)

4. Выполняем стойку «ап куби» — длинная стойка с опорой на переднюю ногу (ширина стойки примерно ширина плеч, задняя нога прямая, пятку не отрываем от пола, колено передней согнутой ноги над носком). Левая нога на месте, правая назад. 2-3 шага вперед из стойки, затем назад.

5. Из стойки «ап соги» — короткая стойка «шаг» выполняем нижний блок и затем удар кулаком в корпус, продолжаем передвижения с этой комбинацией.

6. Из стойки «ап куби» — длинная стойка с опорой на переднюю ногу, удар кулаком вперед в корпус. Передвижение с этим ударом вперед несколько шагов и возвращение назад.

7. Пхумсэ «тхейгук иль джан» — технический комплекс.

2 гып красный пояс

ОФП:

Отжимания, пресс, спина, приседания, выпрыгивание, перекладина.

3 подхода по 30 раз.

Кросс 1000 м.

Растяжка:

Шпагат.

Стойки, блоки:

согласно распечатке формального комплекса (хъёнги).

Техника ног:

Ап чагидвойные удары:прыжковая техника:
Долио чагиНэрио-Ап чагиТвимио Ап чаги
Юп чагиДолио-Горо чагиТвимио Юп чаги
Нэрио чагиАп-Долио чагиТвимио Долио чаги
Горо чагиТоро Юп-Юп чагиТвимио Горо чаги
Торо юп чагиТоро Горо-ДолиоТвимио Торо Юп чаги
Торо горо чагиТвимио Торо Горо чаги

 

Комбинации:

6 комбинация     смотреть

Хьенги:

Джон-гун хъёнг     смотреть

Той-гё хъёнг     смотреть

Спарринг:

Свободный, 3 раунда по 2 минуты.

Разбивание:

Джеруги, ап чаги, долио чаги, нерио чаги, торо горо чаги, торо юп чаги, Твимио ап чаги, Твимио юп чаги, Твимио долио чаги, Твимио горо чаги, Твимио торо юп чаги, Твимио торо горо чаги.

1 доска 20 мм.

Освобождение от захватов:

Захваты за 1, 2 руки (одноимённые и разноимённые), за горло, волосы, со спины, за отворот добка – 1 способ.

Теория:    

  1. Как переводится слово ТАЭКВОНДО?
  2. Название формы одежды.
  3. Название места занятия Таэквон-До.
  4. Страна, родина Таэквон-До.
  5. Основатель Таэквон-До.
  6. Основатель федерации Таэквон-До ГТФ.
  7. Фамилия тренера — преподавателя.
  8. Счёт по-корейски.
  9. 4 уровня высоты.
  10. Название блоков.
  11. Название стоек.
  12. Название ударов ногами.
  13. Название ударов руками.
  14. Ступени цветных поясов.
  15. Ступени черных поясов.
  16. Разные стили ТКД.
  17. Пять принципов ТКД.
  18. Этикет поведения в зале.
  19. Основные даты ТКД.
  20. Амуниция для поединка по ТКД.
  21. Правила соревнований по хъенгам.
  22. Правила соревнований по мацоги.

перейти к ответам

Рынок экстракта грибов чаги Оценка воздействия COVID-19 и анализ восстановления к 2020-2029 гг.

Пуна, Махараштра, Индия, 13 августа 2020 г. (Wiredrelease) Prudour Pvt. Ltd: Исследовательская отрасль Market.us дает полное исследование мирового рынка экстракта грибов чаги на прогнозируемый период 2020-2029 годов. Исследование рынка экстракта грибов чаги позволяет глубже изучить различные сегменты рынка в зависимости от конечного использования, типов и географии. Последний отчет по экстракту грибов чаги охватывает текущее влияние COVID-19 на характеристики рынка, объем и рост, сегментацию, географические и страновые категории, конкурентную среду, тенденции и планы для этого рынка.Пандемия коронавируса (COVID-19) повлияла на все аспекты жизни во всем мире. В отчете содержится базовое введение в промышленный экстракт гриба чага, включая его определение, применение и технологию производства. Отчет об анализе рынка экстракта гриба чага включает как качественные, так и количественные данные, которые сосредоточены исключительно на различных параметрах, таких как факторы риска рынка экстракта гриба чага, трудности, технические разработки, новые возможности, доступные в отчете об экстракте гриба чага.

Мировой рынок, который сравнивается с размером рынка экстракта гриба чага, долей рынка, фактором роста, ключевыми поставщиками, выручкой, спросом на продукцию, объемом продаж, количеством, структурой затрат и развитием рынка экстракта гриба чага. Цель этого отчета — включить исторические, нынешние и будущие тенденции в области предложения экстракта чаги, объема рынка, цен, торговли, конкуренции и цепочки создания стоимости. В рыночном отчете документируются все важные глобальные бизнес-игроки, объединившиеся с профилями их компаний, размером, стоимостью продукта, техническими характеристиками и возможностями.В нем содержится всесторонний анализ ключевых характеристик мирового рынка экстракта гриба чага. Отчет о рынке экстракта гриба чага будет использоваться в качестве важного руководства для пользователей, чтобы они могли четко понимать каждый фактор, связанный с рынком экстракта гриба чага. Он концентрируется на изучении текущего рынка и предстоящих инноваций, чтобы обеспечить лучшее понимание для предприятий.

В окончательный отчет будет добавлен профессиональный и технический анализ воздействия COVID-19 на промышленность экстракта грибов чаги | Получите бесплатный образец копии по адресу: https: // market.us / report / chaga-maker-extract-market / request-sample /

** Примечание: наш бесплатный образец отчета содержит краткое введение в синопсис, оглавление, подробный список таблиц и рисунков, конкурентный ландшафт и географическую сегментацию, инновации и будущие разработки, основанные на методологии исследования **

Различные сегменты рынка экстракта грибов чаги, описанные в отчете, включают:

Конкурентное место на рынке было проанализировано для основных участников рынка, упомянутых в этом отчете

Eco-Siberia, World of Chaga, Fungi Health, Chaga Mountain, Sayan Health, Nutra Green, Baikal Herbs, Limonnik, Annanda Chaga, Fungi Perfecti и Lgberry

Сегмент рынка по типам:

Двойной экстракт и водный экстракт

Сегмент рынка по областям применения:

Прочие товары и товары для здоровья

Запрос на трекер оценки воздействия Covid-19, получить подробную информацию: https: // market.us / report / chaga-maker-extract-market / # запрос

Ключевые регионы, разделенные во время этого отчета:

Северная Америка (США, страны Северной Америки и Мексика) Европа (Германия, Франция, Великобритания, Россия и Италия) Азия -Тихоокеанский регион (Индия, Китай, Япония, Корея и Юго-Восточная Азия) Южная Америка (Колумбия, Бразилия, Аргентина и т. Д.) Ближний Восток и континент (Саудовский Аравийский полуостров, ОАЭ, Египет, африканская страна и Южная Африка)

Отчет об экстракте грибов чаги Охватывает следующие вопросы:

1.Каковы будут темпы роста рынка, динамика роста рынка экстракта гриба чага

2. Каков предполагаемый размер развивающегося рынка экстракта гриба чага в 2029 году?

3. Ожидается, что на какой сегмент будет приходиться самая большая доля рынка экстракта грибов чаги к 2029 году?

4. Каков анализ продаж, выручки и стоимостного объема по регионам рынка экстракта грибов чаги?

5. Каковы рыночный риск, рыночные возможности и обзор рынка экстракта грибов чаги?

6.Кто являются дистрибьюторами, дилерами и трейдерами на рынке экстракта грибов чаги?

Просмотреть другие исследования, анализ и соответствующие отчеты, выпущенные Market.us

Основные игроки рынка медицинских сверл, затронутые Covid-19 | De Scoutter Medical, B.Braun Sharing Expertise, Nouvag: https://apnews.com/df7ab5c74fb69

  • 52e6e2fc035ada

    Рынок сокетов для микроконтроллеров COVID-19 Воздействие, прогресс, перспективы на 2029 г. | AP Newsroom: https://apnews.com/ed5a04237221c711afc2fa01eb6f1ea2

    Содержание

    1.Обзор рынка, включая объем, определение и допущения

    2. Конкуренция на рынке производителей

    3. Производственные мощности, производство, выручка (стоимость) по регионам)

    4. Предложение (производство), потребление, экспорт, импорт по регионам

    5 . Производство, доход (стоимость), динамика цен по типам

    6. Анализ рынка по приложениям

    7. Профили / анализ производителей

    8. Анализ производственных затрат

    Вы можете напрямую приобрести этот рыночный отчет, используя эту безопасную ссылку здесь: https: // market.us / Purchase-report /? report_id = 21188

    9. Производственная цепочка, стратегия снабжения и покупатели в сфере переработки и сбыта продукции

    10. Анализ маркетинговой стратегии, дистрибьюторы / трейдеры

    11. Анализ факторов влияния на рынок

    12. Прогноз рынка экстракта гриба чаги 2020-2029

    13. Результаты исследования и заключение

    14. Приложение

    Список таблиц

    Список цифр

    Полный отчет с фактами и цифрами из обзора рынка экстракта грибов чаги можно найти по адресу: https: // market.us / report / chaga-groom-extract-market /

    О Market.us:

    Market.US специализируется на углубленных исследованиях и анализе рынка и доказывает свою квалификацию как консалтинговая и специализированная компания по исследованию рынка, помимо являясь очень востребованной фирмой, предоставляющей синдицированные отчеты о маркетинговых исследованиях. Market.US обеспечивает настройку в соответствии с любыми конкретными или уникальными требованиями и составляет отчеты по запросу. Мы выходим за границы, чтобы поднять аналитику, анализ, изучение и взгляды на новые высоты и более широкие горизонты.Мы предлагаем тактическую и стратегическую поддержку, которая позволяет нашим уважаемым клиентам принимать обоснованные бизнес-решения, намечать планы на будущее и каждый раз добиваться успеха. Помимо анализа и сценариев, мы предоставляем информацию и данные на глобальном, региональном и национальном уровнях, чтобы гарантировать, что ничто не останется скрытым на любом целевом рынке. Наша команда проверенных специалистов продолжает преодолевать барьеры в области маркетинговых исследований, поскольку мы продвигаемся вперед с новым и постоянно расширяющимся вниманием к развивающимся рынкам.

    Свяжитесь с нами:

    Г-н Бенни Джонсон

    Market.us (на платформе Prudour Pvt. Ltd.)

    Отправить электронное письмо: [email protected]

    Адрес: 420 Lexington Avenue, Suite 300 New York City, NY 10170, США

    Тел .: +1718 618 4351

    Веб-сайт: https://market.us

    Если вас заинтересовала эта история исследования рынка, вас также могут заинтересовать статьи ниже:

    Прочтите: [Тенденции новостей] Рынок переносных датчиков температуры Последние тенденции, сделки, предложение, спрос, перспективы к 2029 году

    Прочтите: Абсолютные возможности рынка медицинских стетоскопов и цепочка создания стоимости с исследованием воздействия COVID-19 (2020-2029)

    Этот контент был опубликован Prudour Pvt.ООО. Отдел новостей WiredRelease не участвовал в создании этого контента. По вопросам предоставления пресс-релизов обращайтесь к нам по адресу [email protected]

    Мировой рынок продуктов на основе грибов чаги 2020-2024 | Расширяющиеся возможности с Annanda Chaga Mushrooms and Baikal Herbs Ltd.

    ЛОНДОН — (БИЗНЕС-ПРОВОД) — 19 февраля 2020 г.-

    Рынок продуктов на основе грибов чага вырастет на 11,31 млрд долларов США в течение 2020-2024 гг. прогрессирует со среднегодовым темпом роста более 14% в течение прогнозируемого периода. Запросите бесплатные образцы страниц

    Этот пресс-релиз содержит мультимедиа. Посмотреть полный выпуск можно здесь: https://www.businesswire.com/news/home/2020021

    61/en/

    Компания Technavio объявила о своем последнем отчете об исследовании рынка под названием «Глобальный рынок продуктов на основе грибов чаги 2020–2024» (Изображение: Business Wire )

    Прочтите 120-страничный отчет с оглавлением «Отчет об анализе рынка продуктов на основе грибов чаги с разбивкой по областям применения (продукты питания и напитки, средства личной гигиены) и географическому положению (Азиатско-Тихоокеанский регион, Европа, MEA, Северная Америка и Южная Америка)». , и сегментный прогноз на 2020-2024 годы ».

    https://www.technavio.com/report/chaga-mushroom-based-products-market-industry-analysis

    Рынок определяется пользой для здоровья гриба чага. Кроме того, ожидается, что запуск новых продуктов на основе грибов чага будет стимулировать рост рынка продуктов на основе грибов чага.

    Грибы чаги богаты витамином D, калием, кальцием, витамином B, аминокислотами, клетчаткой и другими питательными веществами, необходимыми для человеческого организма.Гриб чага обладает сильными антиоксидантными свойствами, которые замедляют процессы старения организма, вызванные окислительным стрессом. Гриб чага также помогает уменьшить воспаление благодаря своей способности подавлять экспрессию химических медиаторов воспаления. Гриб чага также уменьшает воспаление в клетках толстой кишки, что может помочь в лечении воспалительного заболевания кишечника. Следовательно, различные полезные для здоровья свойства, связанные с употреблением грибов чага, являются одним из основных факторов роста мирового рынка продуктов на основе грибов чага.

    Купите 1 отчет Technavio и получите второй со скидкой 50%. Купите 2 отчета Technavio и получите третий бесплатно.

    Перед покупкой ознакомьтесь с снимком рынка

    Основные пять компаний, производящих продукты на основе грибов чага:

    Аннанда грибы чаги

    Аннанда грибы чаги предлагает несколько продуктов, включая экстракты грибов, измельченные грибы чаги, средства для ухода за кожей грибов и другие. Компания также предоставляет средства по уходу за кожей Annanda Chaga и чай Annanda Chaga Mushroom ImmuniTea.

    ООО «Байкальские травы»

    ООО «Байкальские травы» — один из крупнейших российских производителей различных натуральных продуктов, в том числе экстрактов трав и растений, таких как экстракт леузы, экстракт родиолы, экстракт сибирского женьшеня, экстракт лимонника и др., А также множество видов травяных чаев. Компания предлагает на рынке такие продукты, как экстракт чаги и чай из чаги.

    Chaga Mountain Inc.

    Chaga Mountain Inc. предлагает продукты для ухода за кожей, домашних животных, чайные принадлежности, экстракты и другие продукты.Компания предлагает сырые кусочки чаги, чайные пакетики с грибами чага и двойной экстракт чаги.

    Four Sigma Foods Inc.

    Four Sigma Foods Inc. предлагает различные продукты на основе грибов, такие как кофе, какао, смеси, эликсиры, латте и другие. Компания предлагает такие продукты, как Mushroom Mocha with Chaga, Chaga ELIXIR и Mushroom Lemonade с древесным углем и Chaga.

    Laboratoire Saeve

    Laboratoire Saeve предлагает продукты для дневного и ночного ухода, ухода за глазами и губами, ухода за телом и других целей.Компания предлагает укрепляющую антивозрастную растительную сыворотку на основе органического сока березы и органического сока чаги.

    Зарегистрируйтесь для получения бесплатной пробной версии сегодня и получите мгновенный доступ к более чем 17 000 отчетов об исследованиях рынка.

    Платформа ПОДПИСКИ Technavio

    Прогноз по применению продуктов на основе грибов чаги (выручка, млрд долларов США, 2020-2024 гг.)

    • Продукты питания и напитки
    • Товары личной гигиены
    Региональные грибы

    Outlook (выручка, млрд долларов США, 2020-2024 гг.)

    • APAC
    • Европа
    • MEA
    • Северная Америка
    • Южная Америка

    Образцы отчетов Technavio бесплатны и содержат несколько разделов отчета, такие как размер рынка и прогноз, драйверы, проблемы, тенденции и многое другое. Запросить бесплатный образец отчета

    О Technavio

    Technavio — ведущая глобальная исследовательская и консультационная компания в области технологий. Их исследования и анализ сосредоточены на тенденциях развивающихся рынков и предоставляют практические идеи, которые помогают предприятиям определять рыночные возможности и разрабатывать эффективные стратегии для оптимизации своих рыночных позиций.

    Библиотека отчетов Technavio, насчитывающая более 500 специализированных аналитиков, включает более 17 000 отчетов и подсчетов, охватывающих 800 технологий из 50 стран.Их клиентская база состоит из предприятий любого размера, в том числе более 100 компаний из списка Fortune 500. Эта растущая клиентская база опирается на всесторонний охват, обширные исследования и практическую информацию о рынке Technavio для выявления возможностей на существующих и потенциальных рынках и оценки их конкурентных позиций в условиях меняющихся рыночных сценариев.

    См. Исходную версию на businesswire.com: https://www.businesswire.com/news/home/2020021

    61/en/

    КОНТАКТ: Technavio Research

    Джесси Майда

    Руководитель по медиа и маркетингу

    США: +1 844 364 1100

    Великобритания: +44 203893 3200

    Электронная почта: media @ technavio.com

    Веб-сайт: www.technavio.com/

    КЛЮЧЕВОЕ СЛОВО:

    КЛЮЧЕВОЕ СЛОВО ОТРАСЛИ: РОЗНИЧНАЯ ПРОДАЖА ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ / НАПИТКОВ ПРОЧИЕ ЗДОРОВЬЕ

    ИСТОЧНИК: Technavio Research

    Авторские права Business Wire 2020.

    ПУБ: 19.02.2020 18:30 / ДИСК: 19.02.2020 18:31

    http://www.businesswire.com/news/home/2020021

    61/en

    Химические характеристики и биологические активность лекарственного «гриба» чаги (Inonotus obliquus)

    Этнофармакологическая актуальность: В русской народной медицине экстракт гриба Inonotus obliquus (фр.) Pil´at используется как противоопухолевое и мочегонное средство. Сообщалось, что Inonotus obliquus обладает терапевтическими эффектами, такими как противовоспалительное, иммуномодулирующее и гепатопротекторное действие. Это исследование было разработано для изучения химического состава и биологических свойств водных и спиртовых экстрактов Inonotus obliquus из Финляндии, России и Таиланда. Были протестированы их антиоксидантные, противомикробные и антикворумные свойства, а также цитотоксичность на различных линиях опухолевых клеток.

    Материалы и методы: Исследуемый экстракт подвергали стандартному химическому исследованию на выявление органических кислот и фенольных соединений. Антиоксидантную активность измеряли несколькими различными анализами. Противомикробный потенциал экстрактов был протестирован методом микроразведения, а активность экстрактов Inonotus obliquus в отношении чувствительности к антикворуму и образование антибиотических пленок была проверена на Pseudomonas aeruginosa.Цитотоксичность экстрактов тестировали на опухолевых клетках (MCF-7, NCI-h560, HeLa и HepG2) и первичных культурах неопухолевых клеток печени.

    Полученные результаты: Щавелевая кислота оказалась основной органической кислотой, ее наибольшее количество содержится в водном экстракте из России. Во всех образцах были обнаружены галловая, протокатеховая и п-гидроксибензойная кислоты. Экстракты Inonotus obliquus показали высокую антиоксидантную и антимикробную активность.Экстракты были протестированы в subMIC на активность антикворума (AQS) у Pseudomonas aeruginosa, и все экстракты показали определенную активность AQS. Анализы проводили с использованием подергивания и скопления бактериальных культур и количества продуцируемого пиоцианина в качестве параметров QS. Все экстракты продемонстрировали цитотоксическое действие на четыре линии опухолевых клеток, но не на первичные клетки печени свиньи PLP2.

    Выводы: Поскольку присутствие Inonotus obliquus в конках чаги ограничено, для получения количественных выводов необходима дальнейшая очистка.Наличие активности AQS в лекарственных грибах предполагает более широкую защиту от инфекционных заболеваний, чем только иммуномодулирующие эффекты.

    Ключевые слова: Антимикробная активность; Антиоксидантные свойства; Эффект антикворума; Противоопухолевое действие; Химическая характеристика; Inonotus obliquus.

    Витамин А | LearnSkin

    Чага ( Inonotus Obliquus) — это пример традиционной медицины, которая использовалась на протяжении сотен лет и вернулась в наши дни в качестве популярного суперпродукта.В дополнение к простой чашке чая, чага теперь можно найти в таких формах, как добавки, настойки, кофейные смеси с грибами и т. Д. [1] Русское название «чага» переводится как слово «гриб» и также известно как бананатаке. в Японии. [1,2] Чага — гриб-паразит, который растет преимущественно на ветвях березы в более холодных регионах, таких как некоторые части России, Японии, Китая, Кореи и Северной Америки. [1-3] Его традиционно собирали, сушили и готовили в виде простого чайного отвара для лечения недугов и предотвращения болезней. [4]

    Предполагаемые преимущества чаги для здоровья включают: [2,3]

    1. Противовоспалительное

    2. Противораковые

    3. Антивирусные

    4. Антиоксидант

    5. Гипогликемический

    6. Иммуномодуляция

    Выносливый гриб

    Одна интересная теория, лежащая в основе многих полезных компонентов чаги, ведущих к этим преимуществам для здоровья, может быть результатом ее естественного защитного механизма от холода, суровой окружающей среды, в которой ему необходимо адаптироваться для защиты от воздействия ультрафиолета и других патогенов. [5,6] Хотя фактические механизмы действия требуют дополнительных исследований в будущем, вот несколько наиболее известных полезных компонентов чаги: [5,6]

    1. Бета-глюканы

    2. Меланин и аналоги гистидина

    3. Тритерпеноиды

    4. Супероксиддисмутаза и каталаза

    Есть ли будущее у чаги в уходе за кожей?

    Антиоксидантный потенциал чаги представляет особый интерес для будущего ухода за кожей из-за специфических компонентов меланина и аналогов гистидина (полифенолов), а также супероксиддисмутазы и каталазы (ферментов, которые действуют как мощные антиоксиданты). [6,7] Считается, что эти соединения образуются в результате воздействия чаги в естественной среде обитания. [5-7]

    Антиоксидантный потенциал

    Одно исследование [6] было сосредоточено на производстве этих компонентов в ответ на окислительный стресс (в форме перекиси водорода). Результаты этого исследования показали увеличение полифенолов, супероксиддисмутазы и каталазы в ответ на стресс. [6] Эти результаты могут свидетельствовать о том, что способность чаги защищать организм от активных форм кислорода (которые могут быть воспалительными и разрушительными в организме) усиливается из-за естественного воздействия агрессивных элементов.

    Способность к изменению пигмента

    Другое исследование [7] рассматривало возможные возможности уменьшения пигментации, присутствующие в чаге. Меланин — это то, что придает коже цвет, и является естественной реакцией на воздействие солнечного света. [7] Тирозиназа — это фермент, который увеличивает выработку меланина, и интерес в этом исследовании заключался в том, чтобы выяснить, обладает ли чага снижающим пигмент эффектом, который дает те же эффекты, что и отбеливающее средство для кожи, обычно встречающееся в косметике. [7] Исследование проводилось на лабораторных клетках и показало, что некоторые составляющие молекулы (бетулин и траметеноловая кислота) могут снижать выработку пигментов за счет снижения активности фермента тирозиназы, в то время как другие составляющие молекулы (инотодиол и ланостерин) могут активировать тирозиназу для производства больше пигмента. Уменьшение пигментации может помочь выровнять тон кожи у тех, у кого появились более темные пятна, в то время как активация пигмента может быть полезна в условиях, когда пигмент был потерян или уменьшен.Чага кажется более универсальной, и мы надеемся, что дальнейшие исследования позволят выявить, как различные компоненты могут быть полезны в косметическом отношении.

    Будущий потенциал для исследований

    В будущих исследованиях есть потенциал для определения дополнительных преимуществ чаги с точки зрения ее антиоксидантного потенциала и природных химических компонентов, которые могут уменьшить или даже активировать производство пигментов.

    * Этот веб-сайт предназначен только для получения общей информации о красоте, благополучии и здоровье кожи.Этот веб-сайт не должен использоваться вместо медицинских консультаций, диагностики или лечения любого состояния или проблемы со здоровьем. Информация, представленная на этом веб-сайте, никогда не должна использоваться для игнорирования, отсрочки или отказа от лечения или совета врача или квалифицированного поставщика медицинских услуг.

    Границы | Инотодиол из гриба чаги Inonotus obliquus вызывает атипичное созревание дендритных клеток

    Введение

    Дендритные клетки (ДК) представляют собой профессиональные антигенпрезентирующие клетки, которые связывают врожденный и адаптивный иммунные ответы.ДК активируются микробными компонентами, такими как липополисахарид (LPS) (1), и цитокинами, такими как фактор некроза опухоли (TNF) -α (2). Незрелые ДК экспрессируют низкие уровни поверхностных молекул главного комплекса гистосовместимости класса II (MHC-II) и костимулирующих молекул и производят мало провоспалительных цитокинов или не вырабатывают их (3, 4). При классическом созревании ДК демонстрируют сниженное поглощение антигена, повышенную экспрессию MHC-II и костимулирующих молекул, таких как CD86 и CD40, способность продуцировать большое количество цитокинов и активную миграцию в дренирующие лимфатические узлы (3, 4).Созревшие ДК являются сильными индукторами Т-клеточного ответа против определенных патогенов (5).

    Секреция цитокинов DC является важным сигналом для индукции дифференцировки Т-клеток (6). Стимулированные ДК секретируют цитокины, причем баланс между провоспалительными (например, IL-12, IL-6 и IL-1β) и иммунодепрессивными (например, IL-10) цитокинами определяется окружающей средой (7). Незрелые ДК становятся зрелыми эффекторными ДК, которые способствуют развитию Th 1 , Th 2 или регуляторных Т-клеток (8), тогда как незрелые ДК сами по себе и ДК без костимулирующего сигнала и продукции цитокинов могут вызывать анергию Т-клеток (9).ДК в полузрелом состоянии лишены определенных фенотипических маркеров или продуцируют меньшее количество провоспалительных цитокинов, что может привести к толерогенному исходу после взаимодействия с реагирующими Т-клетками (10). Таким образом, продукция цитокинов активированных DC важна для генерации эффекторных ответов в Т-клетках.

    Inonotus obliquus ( I. obliquus ), известный как гриб чага, является богатым источником природных соединений с широким спектром биологически активных компонентов (11–13).Согласно химическому анализу I. obliquus , полисахариды, тритерпены и полифенолы ответственны за большинство его биологических эффектов (14). Одним из этих компонентов является инотодиол, тритерпеноид ланостанового типа, обладающий различной биологической активностью, включая противоопухолевую (15, 16), противовирусную (17) и противовоспалительную (18). Недавно было показано, что инотодиол облегчает симптомы аллергии за счет воздействия на тучные клетки, но не на Т-клетки CD4 + на мышиной модели пищевой аллергии (19).Однако, насколько нам известно, отсутствуют данные об иммуномодулирующей способности инотодиола или о модуляции постоянного тока его потенциальными иммуномодулирующими способностями.

    В этом исследовании мы обнаружили, что обработка ДК инотодиолом увеличивала экспрессию поверхностных маркеров на ДК, не влияя на секрецию провоспалительных цитокинов, что указывает на то, что стимулированные инотодиолом созревшие ДК представляют фенотип, отличный от классического созревания, индуцированного ЛПС.

    Материалы и методы

    Культуральная среда и реагенты

    ДК культивировали в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St.Луис, Миссури, США) с добавлением 10 мМ пирувата натрия, 10 мкг / мл пенициллина и стрептомицина, буфера HEPES, 2 г / л NaHCO 3 , 100 мкМ β-меркаптоэтанола и 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) ( Культуральная среда DC, далее). Культуральная среда DC была использована во всех экспериментах in vitro , если не указано иное. Рекомбинантный мышиный IL-4 и рекомбинантные мышиные факторы стимуляции колоний гранулоцитов / макрофагов (GM-CSF) были приобретены у JW Creagene (Сеул, Южная Корея). Моноклональные антитела против MHC-I, MHC-II, CD80, CD86 и CD40 были получены от eBioscience (Сан-Диего, Калифорния, США).ЛПС из Escherichia coli (O111: b4), ланостерин, SB203580, PD98059 и LiCl были приобретены у Sigma-Aldrich. Wortmannin, SB415286, SB216763 и BMS345541 были приобретены у R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота, США).

    Очистка инотодиола из экстракта чаги

    Высушенные на воздухе склероции гриба чага (220 г) измельчали ​​на мелкие кусочки и экстрагировали этанолом при комнатной температуре в течение 20 часов. Этанольный экстракт концентрировали при пониженном давлении, получая 2.8 г коричневого аморфного твердого вещества. Этот материал подвергали колоночной хроматографии на силикагеле (50-160 мм) (Сорбполимер, Россия), используя систему гексан / этилацетат (5: 2) в качестве подвижной фазы. Полученный концентрат инотодиола (1,08 г) очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (хроматограф Agilent 1100, оборудованный дифференциальным рефрактометром) на колонке Ultrasphere-Si (10 × 200 мм, 5 мкм) с Система гексан / этилацетат (5: 2) в качестве подвижной фазы (скорость потока 2 мл / мин), давая чистый инотодиол (320 мг) и 3β-гидроксиланоста-8,24-диен-21-ал (35.3 мг) (названный в этом исследовании ланостералом) (рис. 1А). Инотодиол и ланостерал были идентифицированы с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) 1 H (рис. 1B) и 13 C, как сообщалось (20, 21).

    Рисунок 1 Очищенный инотодиол из I obliquus . (A) Химическая структура ланостерина, инотодиола и ланостерала. (B) 1 Спектр ЯМР H для определения химической структуры образца инотодиола. (C) ВЭЖХ анализ чистоты инотодиола.

    Оценка чистоты инотодиола

    Чистоту инотодиола анализировали с использованием хроматографа Agilent 1100, оборудованного дифференциальным рефрактометром, на обращенно-фазовой колонке Supelco Ascentis RP-Amide (10 × 250 мм, 5 мкм) с метанолом в качестве подвижной фазы (скорость потока 2 мл / мин). Инотодиол растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и исходные растворы разбавляли культуральной средой DC.

    Подготовка дендритных клеток, полученных из костного мозга

    Мышей C57BL / 6 и BALB / c содержали в соответствии с руководящими принципами по уходу за животными Институционального комитета по уходу и использованию животных Университета Аджу (2015-0028).Образцы костного мозга (КМ) получали от мышей-самцов C57BL / 6. BMDC мыши получали из предшественников BM мыши, как описано ранее (22, 23). Бедренные и большеберцовые кости мышей C57BL / 6 удаляли, а полости BM промывали, используя 10 мл буфера EDTA: сбалансированный солевой раствор (BSS) (EDTA: BSS) с 2% FBS. После центрифугирования при 1200 об / мин в течение 5 минут клетки инкубировали с 1 мл буфера для лизиса эритроцитов (Sigma-Aldrich) при постоянном перемешивании на льду в течение 2 минут. Клетки промывали буфером EDTA: BSS, а затем ресуспендировали в полной культуральной среде DC и фильтровали через фильтр для клеток 70 мкМ (Falcon Corning, Arizona, USA).Клетки дифференцировали в полной культуральной среде DC с добавлением 20 нг / мл IL-4 и GM-CSF в 6-луночном культуральном планшете с плотностью посева 3 × 10 6 клеток / мл. На третий день инкубации добавляли ту же концентрацию IL-4 и GM-CSF и обновляли половину культуральной среды DC. Незрелые BMDC собирали на 7 день инкубации. Путем иммуномагнитной селекции клеток CD11c + BMDC очищали до> 90% с использованием микрогранул CD11c Microbeads Ultrapure (Miltenyi Biotec, Bergisch-Gladbach, Германия).Клетки были идентифицированы как незрелые DC CD11c + на основании низкой экспрессии костимулирующих молекул на поверхности MHC-II и CD80, CD86 и CD40.

    Очистка перитонеальных макрофагов и культура клеток Raw264.7

    Мышам C57BL / 6 внутрибрюшинно вводили 3% тиогликолят в дистиллированной воде в течение 3 дней. Внутрибрюшинные клетки выделяли промыванием фосфатно-солевым буфером (PBS), а макрофаги очищали микрогранулами, связанными с антителами против F4 / 80 (Miltenyi Biotec).Клетки мышиных макрофагов Raw264.7 были получены из Korean Cell Bank (Сеул, Корея) и выращены в среде RPMI-1640 (GIBCO / Invitrogen, Grand Island, NY, США), содержащей 10% FBS с добавлением пенициллина / стрептомицина.

    Стимуляция дендритных клеток костного мозга с помощью инотодиола

    Для исследования эффекта инотодиола BMDC культивировали в культуральной среде DC в 24-луночном планшете (2 × 10 5 клеток / мл), стимулированном 0,01% ДМСО. (контроль носителя), 25 мкМ инотодиола и 1 мкг / мл ЛПС в течение 24 часов.В конечной точке культивирования молекулы клеточной поверхности определяли проточной цитометрией. Бесклеточные супернатанты собирали и хранили при -80 ° C для измерения уровня секретируемых цитокинов. Все последующие эксперименты проводили после стимуляции BMDC указанными концентрациями, если не указано иное.

    Проточная цитометрия

    Клетки промывали буфером EDTA: BSS, предварительно обрабатывали 2% мышиной сывороткой для блокирования неспецифического связывания антител и метили флуоресцентно-конъюгированными антителами против MHC-I, MHC-II, CD80, CD86 и CD40. на льду в течение 30 мин с последующей промывкой тем же буфером.Мертвые клетки были исключены с помощью красителя жизнеспособности 7-аминоактиномицина D (7-AAD) (eBioscience), а 7-AAD-отрицательная популяция была затем проанализирована с использованием проточного цитометра MACSQuant VYB (Miltenyi Biotec) в центре трехмерной визуализации иммунной системы в г. Университет Аджу. Данные проточной цитометрии анализировали с помощью программного пакета FlowJo v10 (Tree Star, Ashland, OR, США). Уровни экспрессии MHC и костимулирующих молекул выражали в процентах или средней интенсивности флуоресценции (MFI) положительно окрашенных клеток среди клеток CD11c + .

    Измерения цитокинов

    После стимуляции CD11c + BMDC (2 × 10 5 ) инотодиолом (25 мкМ) и LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов, TNF-α, IL-12p40, IL- 6, цитокины IL-1β, IL-2, IL-12p70, IL-4, IL-5 и интерферон (IFN) -γ из бесклеточного супернатанта анализировали с использованием стандартных наборов для иммуноферментного анализа (ELISA) ( R&D Systems) со стандартными препаратами цитокинов в качестве внутреннего контроля. Планшеты считывали при длине волны 450 нм с использованием автоматического ридера для микропланшетов (BioTek, Вермонт, США).В соответствии с руководством пользователя также использовали набор Proteome Profiler Mouse Cytokine Array Kit (R&D Systems).

    MLR Assay

    CD4 + и CD8 + Т-клетки были обогащены иммуномагнитно-отрицательной селекцией из селезенки мышей Balb / c с использованием гранул, меченных CD11b, CD11c, CD19, CD45R, CD49b, CD105, MHC-II, Ter-119 и разделительные колонки TCR / γδ (Miltenyi Biotec) и MACS (Miltenyi Biotec). Выделенные CD4 + и CD8 + Т-клетки метили 10 мкМ сукцинимидилового эфира диацетата карбоксифлуоресцеина (CFSE) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).BMDC (5 × 10 3 ) обрабатывали LPS и инотодиолом в 96-луночном планшете (Costar, Кембридж, Массачусетс, США) в течение 24 часов, после чего Т-клетки, меченные CFSE (1 × 10 5 ), обрабатывали. добавляли в соотношении DC / T-клетки 1:20, и клетки культивировали при 37, °, ° C в присутствии 5% CO 2 в течение 4 дней. Бесклеточные супернатанты были получены и исследованы на секрецию цитокинов. Пролиферацию Т-клеток измеряли на основании процента разведения CFSE.

    In vitro Анализ пролиферации CD8 + Т-клеток

    BMDC (2 × 10 5 ) стимулировали или не стимулировали инотодиолом и LPS в 96-луночном планшете в течение 24 часов.Затем на BMDC воздействовали 10 мкМ овальбумина (OVA) 257-264 пептидом SIINFEKL (InvivoGen, Сан-Диего, Калифорния, США) в течение 1 часа. Наивные CD8 + Т-клетки из селезенки трансгенных мышей OT-I выделяли с использованием набора для выделения Т-клеток CD8 (Miltenyi Biotec) и метили 10 мкМ CFSE в течение 10 мин. После очистки и мечения Т-клетки CD8 + (1 × 10 5 ) инкубировали со стимулированными и импульсными DC (5 × 10 3 ) при соотношении DC / T-клеток 1:20 в течение 4 дней.Затем пролиферацию анализировали на разведение CFSE в пролиферирующих Т-клетках.

    Анализ экспрессии CD86 в дендритных клетках селезенки CD11c + и продукции цитокинов в крови мышей, которым вводили инотодиол

    ДМСО (0,01%) (контроль), инотодиол (6,5 мг / кг) и ЛПС (250 мкг / кг) были вводили в хвостовую вену мышей C57 / BL6 в возрасте 6-8 недель. Селезенки собирали и обрабатывали ДНКазой (20 мкг / мл) и коллагеназой (1 мг / мл) через 24 часа после инъекции. Выделяли общие клеточные суспензии (2 × 10 6 ) селезенки и окрашивали антителами против CD11c, анти-CD86, анти-MHC-II и анти-MHC-I и процентным содержанием CD86 + , Клетки MHC-II + и MHC-I + среди популяции CD11c + были количественно определены с помощью проточной цитометрии.Для анализа внутриклеточной экспрессии IL-2 клеточные поверхности изолированных спленоцитов окрашивали анти-CD4 (eBioscience) и анти-CD8-антителами (eBioscience), конъюгированными с APC-флуорофором, и клетки фиксировали с использованием 1% параформальдегида. Затем клетки пермеабилизировали с использованием 0,1% Triton X-100 в буфере EDTA: BSS, содержащем 2% FBS, и окрашивали антителами против IL-2, конъюгированными с FITC (Invitrogen). Внутриклеточную экспрессию IL-2 измеряли в клетках CD4 + и CD8 + с помощью проточной цитометрии.Кровь собирали в пробирки, содержащие ингибиторы протеаз (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), через 24 часа после внутривенной инъекции инотодиола и ЛПС мышам, и концентрации IL-2 и TNF-α в сыворотке определяли количественно с помощью наборов для ELISA. (Системы НИОКР). 10 Красный краситель мкМ клеточного трекера (CellTracker ™ Cell Proliferation Kit, Thermo Fisher Scientific) в течение 20 минут при 37 ° C и 10 мкМ CFSE в течение 30 минут при 37 ° C, как описано ранее (24, 25).Красный краситель клеточного трекера использовался перед переносом донорских Т-клеток для отслеживания введенных Т-клеток у мышей-реципиентов, поскольку сообщалось, что краситель клеточного трекера пересекает плазматическую мембрану клеток, где стабильная и хорошо удерживаемая флуоресцентная метка предлагает последовательный флуоресцентный сигнал (24). Меченые флуоресценцией OT-I CD8 + Т-клетки (5 × 10 6 на реципиента) инъецировали в хвостовые вены мышей-реципиентов C57BL / 6 ( n = 3). In vivo стимуляцию введенных Т-клеток OT-I проводили через 16 часов после переноса клеток путем внутривенной инъекции 20 мкг белка OVA (Sigma Aldrich) с ДМСО (0.01%), инотодиол (6,5 мг / кг) и ЛПС (250 мкг / кг) в качестве положительного контроля для мышей-реципиентов C57BL / 6. Параллельно мы также протестировали in vivo эффектов BMDC, обработанных инотодиолом, на пролиферацию Т-клеток. BMDC (2 × 10 5 ) стимулировали инотодиолом или LPS в течение 24 часов, а на стимулированные клетки воздействовали 10 мкМ пептида OVA 257-264 в течение 1 часа при 37 ° C. Затем клетки с импульсами OVA вводили в подушечку стопы через 16 часов после введения флуоресцентно меченных OT-I CD8 + Т-клеток (2 × 10 6) мышам-реципиентам ( n = 3).Через четыре дня селезенку мышей-реципиентов извлекали и измеряли степень пролиферирующих Т-клеток как процент клеток, разведенных CFSE, среди клеток, положительных по красителю в клеточном трекере. Параллельно с анализом пролиферации Т-клеток собирали кровь путем сердечной пункции для количественного определения цитокинов в сыворотке.

    Количественное определение поглощения декстрана

    CD11c + BMDC стимулировали или нет инотодиолом (25 мкМ) и LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов, а затем инкубировали с 1 мг / мл FITC-декстрана (40 кДа) ( Sigma-Aldrich) при 4 ° C (для внутреннего контроля) или 37 ° C в течение 30 и 60 мин.Клетки промывали буфером EDTA: BSS и метили на льду APC-конъюгированными антителами к CD11c. Поглощение декстрана рассчитывали как разницу в MFI между образцами клеток.

    Вестерн-блоттинг

    Уровни фосфорилированных киназ, включая киназу, регулируемую фосфо-внеклеточным сигналом (ERK) -1/2 (p-ERK-1/2), фосфо-p38 митоген-активируемую протеинкиназу (MAPK) (p- p38 MAPK), фосфо-Akt (p-Akt), киназу фосфогликогенсинтазы (GSK) -3β (p-GSK-3β) и фосфо-IκB киназу (IKK) (p-IKK) оценивали с помощью вестерн-блоттинга. .При использовании специфических ингибиторов сигнальных путей препараты добавляли за 10 мин до стимуляции инотодиолом (25 мкМ) и ЛПС (1 мкг / мл). Стимулированные BMDC собирали и суспендировали в буфере для лизиса клеток (20 мМ трис-HCl, 150 мМ NaCl, 1 мМ Na2EDTA, 1 мМ EGTA, 1% тритон, 2,5 мМ пирофосфат натрия и 1 мМ β-глицерофосфат), содержащем ингибиторы фосфатазы и протеаз. (Технология сотовой сигнализации). Лизаты клеток инкубировали на льду в течение 20 минут, а затем центрифугировали при 13000 об / мин в течение 10 минут для получения супернатантов.Концентрации белка измеряли с помощью анализа Брэдфорда (Bio Rad, Геркулес, Калифорния, США). Концентрации белка были нормализованы, и равные количества образцов были смешаны с загрузочным буфером для электрофореза в 5-кратном додецилсульфат-полиакриламидном геле (SDS-PAGE) (250 мМ трис-HCl, 0,25% бромфенолового синего, 50% глицерина, 10% SDS и 0,5%). M дитиотреитол), нагревали до 95 ° C в течение 10 мин и хранили при -20 ° C до использования. Белки (10 мкг) разделяли с помощью 12% (об. / Об.) SDS-PAGE и затем переносили на нитроцеллюлозные мембраны с использованием системы Mini-Trans Blot с влажным переносом (Bio Rad).Мембраны промывали 0,05% твина-20 в PBS и затем инкубировали с блокирующим раствором (5% бычий сывороточный альбумин и 0,05% твин-20 в PBS) при комнатной температуре в течение 1 часа. Первичные антитела против p-ERK-1/2 Thr202 / Tyr204 (1: 7 000), ERK-1/2 (1: 4 000), p-p38 MAPK Thr180 / Tyr182 (1: 2 000), p-38 MAPK (1: 4,000), p-Akt Ser473 (1: 1,000), Akt (1: 4,000), p-GSK-3β Ser9 (1: 2,000), GSK-3β (1: 4,000), p -IKK-α / β Ser176 / 180 (1: 4 000), IκB-α (1: 5 000) и β-актин (1: 10 000) были получены от Cell Signaling Technology.Мембраны инкубировали с этими антителами, разведенными в блокирующем растворе, как указано, при 4 ° C в течение 18 часов, промывали и инкубировали с вторичным антителом против кроличьей пероксидазы хрена (1: 10 000) (Abcam, Кембридж, Англия) в блокирующем растворе. при комнатной температуре в течение 1 ч. Хемилюминесценцию детектировали с использованием субстрата Clarity ™ western ECL (Bio-Rad) с последующим воздействием на медицинскую рентгеновскую пленку (AGFA, Mortsel, Бельгия). Оцифрованные изображения анализировали с помощью программного обеспечения ImageJ (NIH, Bethesda, MD, США).

    Статистический анализ

    Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Эффект обработки инотодиолом или LPS по сравнению с контролем носителя определяли с использованием теста Стьюдента t с непарной двухвыборочной равной дисперсией с двусторонним распределением в GraphPad Prism 4 (Сан-Диего, Калифорния, США).

    Результаты

    Очистка и анализ инотодиола

    Инотодиол, тетрациклический тритерпеноид, экстрагировали из высушенного на воздухе гриба чага и подвергали колоночной хроматографии на силикагеле с последующей ВЭЖХ с использованием колонки с нормальной фазой для очистки.Химическая структура полученного инотодиола и его спектры ЯМР соответствовали данным, приведенным в предыдущих сообщениях (21, 26). Образец анализировали с помощью ВЭЖХ с использованием обращенно-фазовой колонки. Хроматограмма ВЭЖХ показала, что полученный инотодиол имел чистоту 97% и время удерживания 11,686 мин (рис. 1С).

    Инотодиол увеличивает экспрессию MHC и костимулирующих молекул в дендритных клетках костного мозга

    В устойчивом состоянии DC незрелые и характеризуются низкой поверхностной экспрессией MHC-I, MHC-II и костимулирующих молекул, таких как CD80 , CD86 и CD40 (8).Чтобы определить, влияет ли инотодиол на созревание DC, мы проанализировали уровень экспрессии CD86 на BMDC с помощью проточной цитометрии. Как показано на рисунке 2А, ​​инотодиол увеличивает экспрессию CD86 в BMDC до уровня, сравнимого с уровнем LPS, который известен как агонист созревания DC. Максимальная экспрессия CD86 была получена с 25 мкМ инотодиола (рис. 2В). Измерения жизнеспособности клеток показали, что инотодиол не токсичен при 50 мкМ (данные не показаны). Таким образом, во всех последующих экспериментах мы использовали концентрацию 25 мкМ.Инотодиол в дозе 25 мкМ увеличивал экспрессию MHC-I, MHC-II, CD80 и CD40 (рис. 2C). Поскольку экспрессия CD86 увеличивалась в BMDC, обработанных инотодиолом (далее Inotodiol-BMDC), перитонеальные макрофаги также значительно увеличивали экспрессию CD86 на своей клеточной поверхности в присутствии инотодиола (дополнительный рисунок S1A). Кроме того, экспрессия CD86 повышалась в обработанных инотодиолом макрофагальных клетках Raw264.7 (дополнительная фигура S1B). Взятые вместе, эти данные показали, что инотодиол усиливает экспрессию MHC-II и костимулирующих молекул в DC и макрофагах.Напротив, ланостерин не смог повысить экспрессию CD86, MHC-II и CD40 в BMDC (дополнительная фигура S2). Родственное производное ланостерина и конгенер инотодиола, ланостерал, также усиливали экспрессию MHC-II и костимулирующих молекул, хотя его эффективность была ниже, чем у инотодиола. Поэтому в данном исследовании мы использовали инотодиол, а не ланостерал, в качестве соединения, стимулирующего постоянный ток.

    Рис. 2 Уровни экспрессии MHC и костимулирующих молекул в BMDC, обработанных инотодиолом. (A) BMDC (2 × 10 5 ) стимулировали ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ) или LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов ( n = 3) . (B) BMDC обрабатывали указанными концентрациями инотодиола в течение 24 часов ( n = 3). (C) BMDC обрабатывали, как на панели A ( n = 3). Уровни экспрессии CD80, MHC-II, MHC-I и CD40 в клетках количественно определяли с помощью проточной цитометрии. Числа представляют собой процентное соотношение клеток в пределах указанных ворот среди клеток CD11c + или значения MFI.Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,01 по сравнению с отсутствием.

    Инотодиол индуцирует зрелый фенотип в дендритных клетках

    Незрелые ДК характеризуются высокой скоростью эндоцитоза (1). Затем мы исследовали изменения эндоцитарной активности в Inotodiol-BMDC, основанные на поглощении декстрана, конъюгированного с флуоресцеином. Как показано на фиг. 3, обработка инотодиолом или LPS в течение 24 часов значительно снижает поглощение FITC-декстрана по сравнению с обработкой DMSO в BMDC, что указывает на то, что Inotodiol-BMDC демонстрируют более низкое поглощение антигена, чем необработанные незрелые BMDC.Этот результат свидетельствует о том, что инотодиол индуцирует зрелый фенотип DC, сравнимый с фенотипом LPS-обработанных BMDC (LPS-BMDC, далее).

    Рис. 3 Поглощение FITC-декстрана BMDC, обработанными инотодиолом. BMDC (2 × 10 5 ) стимулировали ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ) или LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов, а затем инкубировали с FITC-декстраном в течение указанных периодов. при 37 ° С. Значения MFI измеряли с помощью проточной цитометрии. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,001 по сравнению с отсутствием.

    Влияние инотодиола на секрецию цитокинов и хемокинов в дендритных клетках костного мозга

    Мы измерили уровни цитокинов в супернатантах, собранных из BMDC, культивированных с инотодиолом и LPS. LPS-BMDC секретировали высокие уровни TNF-α и IL-6, тогда как Inotodiol-BMDC продуцировали очень низкие количества этих цитокинов (рис. 4). Другие провоспалительные и противовоспалительные цитокины, включая IL-1β, IL-10 и IL-12p40, не продуцируются Inotodiol-BMDC (данные не показаны).Поскольку Inotodiol-BMDC не продуцируют IL-12p40, возможно, что эти клетки индуцируют иммунный ответ Th 2 -проника. Однако продукция IL-4 и IL-5 не увеличивалась в Inotodiol-BMDC (данные не показаны). Затем собирали кондиционированные среды перитонеальных макрофагов, культивированных в присутствии инотодиола (25 мкМ) и LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов, и определяли секрецию цитокинов и хемокинов с использованием набора Proteome Profiler Mouse Cytokine Array Kit. Плотность сигнала хемилюминесценции каждого пятна количественно определяли с помощью ImageJ, и сигналы положительного контроля использовали для нормализации данных массива (дополнительный рисунок S3A).Анализ относительных кратных изменений экспрессии между необработанными и обработанными инотодиолом макрофагами показал, что обработка инотодиолом увеличивает секрецию IL-1ra, CXCL2 и CCL5 и снижает секрецию CXCL13 по сравнению с контролем, тогда как LPS-стимулированные макрофаги секретируют различные цитокины и хемокины. . В частности, секреция TNF-α и IL-6 увеличивалась макрофагами, обработанными LPS, но не обработанными инотодиолом, по сравнению с необработанными контрольными клетками, что наблюдалось в отношении продукции цитокинов с помощью Inotodiol-BMDC.Стимулированные LPS клетки Raw264.7 также продуцировали высокие уровни TNF-α и IL-6, тогда как обработанные инотодиолом клетки Raw264.7 не смогли продуцировать эти цитокины (дополнительный рисунок S3B). Эти результаты свидетельствуют о том, что инотодиол усиливает экспрессию MHC-II и CD86, не влияя на секрецию воспалительных цитокинов в BMDC, а ответы макрофагов на инотодиол аналогичны ответам BMDC.

    Рис. 4 Производство цитокинов BMDC, обработанных инотодиолом. BMDC (2 × 10 5 ) обрабатывали ДМСО (0.01%) (нет), инотодиол (25 мкМ) или ЛПС (1 мкг / мл) в течение 24 часов ( n = 3). Цитокины, секретируемые в супернатантах культур, определяли количественно с помощью ELISA. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,001 по сравнению с отсутствием.

    Пролиферация Т-клеток, индуцированная дендритными клетками, производными инотодиола и костного мозга

    Основная роль зрелых ДК заключается в индукции антиген-специфической активации и пролиферации Т-клеток, в зависимости от природы стимулов ДК (6). Инотодиол способствует атипичному созреванию ДК с активацией MHC-I, MHC-II и костимулирующих молекул, но без выработки провоспалительных цитокинов.Таким образом, мы затем определили способность BMDC стимулировать Т-клетки. Как показано на фиг. 5A, инотодиол-BMDC, которые стимулировали инотодиолом в течение 1 дня и совместно культивировали с Т-клетками селезенки в течение 4 дней, увеличивали пролиферацию Т-клеток селезенки в MLR по сравнению с необработанными контрольными BMDC. Степень пролиферации Т-клеток, индуцированная Inotodiol-BMDC, была аналогична той, которая индуцировалась LPS-BMDC в анализе MLR. Затем BMDC стимулировали добавлением инотодиола или LPS в течение 24 часов, промывали и обрабатывали растворимым пептидом OVA SIINFEKL.Стимулированные BMDC культивировали с OT-I CD8 + Т-клетками (соотношение DC: Т-клетки = 1:20) в течение 4 дней. Как показано на фиг. 5B, импульсные Inotodiol-BMDC с пептидом OVA сильнее индуцируют пролиферацию Т-клеток OT-I, чем нестимулированные BMDC. Аналогичным образом, CD8 + Т-клетки от мышей OT-I подвергались антиген-специфической пролиферации при совместном культивировании с LPS-BMDC, обработанными импульсным пептидом OVA. Затем мы исследовали профиль цитокинов Т-клеток после 4 дней культивирования с инотодиол-BMDC. CD8 + T-клетки, активированные Inotodiol-BMDC, не секретировали IL-12p40, IL-12p70 и IFN-γ, тогда как CD8 + T-клетки, активированные LPS-BMDC, секретировали высокие уровни этих цитокинов по сравнению с необработанными клетками. (Рисунок 6).Кроме того, CD8 + Т-клетки, активированные Inotodiol-BMDC, секретировали очень низкие количества IL-4, IL-5 и IL-10 по сравнению с активированными LPS-BMDC (данные не показаны). Однако Т-клетки OT-I, стимулированные Inotodiol-BMDC, секретировали значительное количество IL-2 в OVA-специфической реакции. Подобно OVA-специфическому представлению, CD4 + и CD8 + Т-клетки в MLR показали значительно индуцированную секрецию IL-2. Т-клетки, инкубированные только с инотодиолом, не пролиферировали и не секретировали IL-2, за исключением митогенного эффекта инотодиола на Т-клетки, и только инотодиол-BMDC не секретировали IL-2 (данные не показаны).Взятые вместе, эти результаты свидетельствуют о том, что инотодиол индуцирует активацию DC без секреции воспалительных цитокинов, а Inotodiol-BMDC способствуют пролиферации Т-клеток за счет продукции только IL-2.

    Рис. 5 Влияние BMDC, обработанных инотодиолом, на пролиферацию Т-клеток. (A) BMDC (5 × 10 3 ), выделенные от мышей C57BL / 6, обрабатывали ДМСО (0,01%) (нет), инотодиолом (25 мкМ) или LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов и затем культивировали с меченными CFSE Т-клетками (1 × 10 5 ), выделенными от мышей Balb / c, в течение 4 дней. (B) BMDC (2 × 10 5 ) обрабатывали ДМСО, инотодиолом или LPS в течение 24 часов и инкубировали с пептидом OVA в течение 1 часа. Стимулированные BMDC (5 × 10 3 ) культивировали с CD8 + Т-клетками (1 × 10 5 ) от мышей OT-I в течение 4 дней. Пролиферацию Т-клеток оценивали путем измерения разведения CFSE с помощью проточной цитометрии. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,05 по сравнению с BMDC, обработанными ДМСО.

    Рис. 6 Производство цитокинов в совместно выращенных BMDC и Т-клетках, обработанных инотодиолом.BMDC, обработанные инотодиолом и LPS, совместно культивировали с Т-клетками селезенки, выделенными от мышей Balb / c (MLR), и Т-клетками OT-I CD8 + (Т-клетки OT-I) в течение 4 дней, как показано на Фигуре 6. Секреция цитокинов определяли с помощью ELISA. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,001 по сравнению с BMDC, обработанными ДМСО.

    Влияние инотодиола на созревание дендритных клеток селезенки и продукцию IL-2

    In vivo

    Мы исследовали, увеличивает ли инотодиол экспрессию CD86 и MHC в селезенке in vivo .Суммарные клеточные суспензии селезенки, собранные через 24 часа после инъекции инотодиола (6,5 мг / кг) и ЛПС (250 мкг / кг) в хвостовую вену, окрашивали анти-CD11c и анти-CD86 антителами, а процентное содержание CD86 составляло + . количество клеток среди клеток CD11c + определяли с помощью проточной цитометрии (фиг. 7A). Внутривенное введение инотодиола привело к усилению экспрессии CD86 на CD11c + DC в селезенке, хотя экспрессия CD86 была ниже у мышей, получавших инотодиол, чем у мышей, получавших LPS.Мы также наблюдали повышенную экспрессию MHC-I и MHC-II в селезенке CD11c + DC мышей, которым вводили инотодиол, и мышей, которым вводили LPS. In vitro Совместное культивирование DC и Т-клеток в присутствии инотодиола привело к продукции только IL-2 без продукции провоспалительных цитокинов, включая TNF-α. Таким образом, мы измерили концентрации ИЛ-2 и ФНО-α в сыворотке крови через 24 ч после введения инотодиола и ЛПС в хвостовую вену. Как показано на Фигуре 7B, продукция IL-2 была значительно увеличена после инъекции инотодиола (248 ± 37 пг / мл) или LPS (431 ± 55 пг / мл) по сравнению с контролем ( P <,0.01). Однако увеличение продукции TNF-α наблюдалось после инъекции ЛПС, но не инотодиола. Затем клетки селезенки мышей, которым инъецировали инотодиол, вводили в клетки CD4 + и CD8 + , и уровни внутриклеточной экспрессии IL-2 измеряли с помощью проточной цитометрии. Клетки IL-2 + были значительно увеличены в клетках CD8 + , но не в клетках CD4 + (фигура 7C). Для сравнения, инъекция LPS увеличивала количество клеток IL-2 + как в клетках CD4 + , так и в клетках CD8 + .Эти результаты предполагают, что индуцированная инотодиолом продукция IL-2 in vivo опосредуется CD8 + Т-клетками.

    Рисунок 7 Экспрессия CD86 и продукция цитокинов у мышей, которым вводили инотодиол. Мышам C57BL / 6 внутривенно вводили ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиол (6,5 мг / кг) или ЛПС (250 мкг / кг) ( n = 3). Спленоциты и кровь выделяли через 24 часа после инъекции. (A) CD11c + DC были выделены из спленоцитов, и уровни экспрессии CD86, MHC-II и MHC-I в клетках CD11c + были количественно определены с помощью проточной цитометрии.Числа представляют собой процентное соотношение клеток в указанных воротах клеток или значения MFI в клетках CD11c + . (B) Концентрации IL-2 и TNF-α в сыворотке измеряли с помощью ELISA. (C) Клетки CD4 + и CD8 + были стробированы из общих спленоцитов, и внутриклеточная экспрессия IL-2 в закрытых клетках была определена количественно с помощью проточной цитометрии. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,01 по сравнению с отсутствием.

    Влияние инотодиола и дендритных клеток, полученных из костного мозга, на перенесенные CD8 + Т-клетки

    In vivo

    Донорские CD8 + Т-клетки от мышей OT-I метили флуоресцентным красным красителем для отслеживания клеток и затем вводили CFSE, а затем вводили внутривенно мышам-реципиентам с последующей инъекцией белка OVA и инотодиола. ЛПС использовали в качестве положительного контроля. Степень разбавления CFSE пролиферирующих Т-клеток CD8 + среди окрашенной клеточным трекером популяции в изолированных спленоцитах мышей-реципиентов измеряли через 4 дня после адоптивного переноса Т-клеток.Сообщалось, что красный краситель для отслеживания клеток обладает характеристиками удерживания клеток с яркой интенсивностью флуоресценции даже после 72 часов окрашивания клеток (24). Анализ проточной цитометрии показал, что процент клеток, положительных по клеточному трекеру, в общем количестве спленоцитов, выделенных у мышей, которым вводили ДМСО, инотодиол и ЛПС, не отличался (фигура 8А). Введение инотодиола значительно увеличивало разведение CFSE в Т-клетках OT-I CD8 + , окрашенных с помощью трекера, по сравнению с контролем. Степень пролиферации Т-клеток, вызванная инъекцией инотодиола, существенно не отличалась от пролиферации, вызванной инъекцией LPS.Затем мы оценили, индуцирует ли введение BMDC, которые атипично созревают под действием инотодиола в культурах in vitro , пролиферацию Т-клеток in vivo . Поэтому мы перенесли красный краситель для отслеживания клеток и Т-клетки OT-I CD8 + , меченные CFSE, мышам C57BL / 6 с последующей инъекцией примированных пептидом OVA Inotodiol-BMDC и LPS-BMDC через 16 часов. На 4 день после инъекции Inotodiol-BMDC пролиферацию Т-клеток исследовали, анализируя разведение CFSE в клетках, окрашенных клеточным трекером (фигура 8B).Введение Inotodiol-BMDC и LPS-BMDC индуцировало пролиферацию перенесенных OT-I CD8 + Т-клеток. Наконец, мы исследовали, индуцируют ли инотодиол и инотодиол-BMDC продукцию цитокинов в крови мышей с перенесенными Т-клетками OT-I CD8 + . Белок OVA и мыши, которым вводили инотодиол, показали повышенные уровни ИЛ-2 в сыворотке по сравнению с контрольными мышами (фигура 8C). Напротив, уровни других цитокинов, включая IL-6, TNF-α, IL-12p40, IL-12p70 и IFN-γ, не были значительно увеличены в сыворотке, полученной от мышей, которым вводили инотодиол, тогда как эти уровни цитокинов были значительно увеличены в сыворотка, полученная от мышей, которым инъецировали ЛПС, по сравнению с контрольными мышами.Мы также наблюдали аналогичную продукцию цитокинов в крови, собранной на 4-й день после внутривенной инъекции Inotodiol-BMDC и LPS-BMDC мышам.

    Фиг. 8 Пролиферация перенесенных OT-I CD8 + Т-клеток и продукция цитокинов после инъекции инотодиола и инотодиола-BMDC in vivo . CD8 + Т-клетки (5 × 10 6 ) от мышей OT-I выделяли, метили красным красителем клеточного трекера и CFSE, а затем вводили мышам, как описано в разделе «Материалы и методы». (A) OVA-белок с ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (6,5 мг / кг) или LPS (250 мкг / кг) внутривенно вводили реципиентам с перенесенными OT-I CD8 + Т-клетки ( n = 3). (B) BMDC (2 × 10 5 ) обрабатывали ДМСО (0,01%) (BMDC, обработанные DMSO), инотодиолом (25 мкМ) (BMDC, обработанные инотодиолом) или LPS (1 мкг / мл) ( BMDC, обработанные LPS) в течение 24 часов и инкубировали с пептидом OVA в течение 1 часа, как показано на рисунке 6, и вводили мышам-реципиентам перенесенные OT-I CD8 + Т-клетки (2 × 10 6) ( n = 3).На 4 день после инъекции инотодиола или инотодиола-BMDC спленоциты выделяли от мышей-реципиентов и оценивали пролиферацию перенесенных Т-клеток путем измерения разведения CFSE среди окрашенных клеточным трекером клеток с использованием проточной цитометрии. (C) Кровь была собрана у мышей-реципиентов, как описано на панелях (A), (на верхней панели) и (B), (на нижней панели) на 4 день после инъекции, и концентрация цитокинов в сыворотку измеряли с помощью ELISA ( n = 3).Числа представляют собой процентное соотношение ячеек в указанных воротах ячеек. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,05 по сравнению с отсутствием. ** P < 0,05 по сравнению с BMDC, обработанным ДМСО.

    Влияние ингибиторов киназ Akt и IκB на экспрессию MHC-II и CD86 в дендритных клетках, полученных из инотодиола и костного мозга

    Известно, что p38 MAPK, Akt и NF-κB ответственны за LPS-индуцированное созревание (27 , 28). Для исследования молекулярного механизма, с помощью которого инотодиол вызывает атипичное созревание ДК, были использованы специфические ингибиторы киназ, включая ингибитор p38 MAPK (SB203580), ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) (вортманнин) и ингибитор IKK (BMS345541) (29). заняты.BMDC предварительно обрабатывали ингибиторами киназ в течение 10 минут, а затем стимулировали инотодиолом или LPS в течение 24 часов. Как показано на фиг. 9A, SB203580 и BMS345541 отменяли повышающую регуляцию экспрессии CD86 в LPS-BMDC, но не в Inotodiol-BMDC, тогда как вортманнин значительно ингибировал позитивную регуляцию экспрессии CD86 как в Inotodiol-BMDC, так и в LPS-BMDC. Также известно, что GSK-3 контролирует созревание и продукцию цитокинов DC (30, 31). Фосфорилирование GSK-3α по Ser 21 и GSK-3β по Ser 9 активированным Akt ингибирует киназную активность GSK-3 (32).Таким образом, влияние инактивации GSK-3β на экспрессию CD86 оценивали с использованием фармакологического ингибитора LiCl и специфических ингибиторов SB415286 и SB216763 (33). SB415286 (10 мкМ) и SB216763 (10 мкМ) по отдельности, а также LiCl значительно усиливали экспрессию CD86 в нестимулированных BMDC, что согласуется с предыдущими результатами (34). Однако SB216763 в концентрации IC 50 (35 нМ) для GSK-3 не влиял на экспрессию CD86 как в Inotodiol-BMDC, так и в LPS-BMDC. SB216763 при высокой концентрации 10 мкМ, но не при низкой концентрации 35 нМ проявлял аддитивный эффект на экспрессию CD86 в Inotodiol-BMDC.На фигуре 9B показано, что экспрессия MHC-II в Inotodiol-BMDC также ингибировалась вортманнином, но не другими ингибиторами киназ. Однако вортманнин не влиял на продукцию TNF-α в Inotodiol-BMDC, тогда как он блокировал увеличение продукции TNF-α в LPS-BMDC (рис. 9C). Кроме того, ни SB216763, ни LiCl не влияли на продукцию TNF-α в Inotodiol-BMDC.

    Фиг. 9 Влияние ингибиторов киназ на экспрессию CD86 и MHC-II и продукцию TNF-α в BMDC, обработанных инотодиолом.BMDC (2 × 10 5 ) были предварительно обработаны или не обработаны различными ингибиторами киназ, включая SB203580 (5 мкМ), PD98059 (10 мкМ), вортманнин (1 мкМ), LiCl (10 мМ), SB415286 (10 мкМ), SB216763 (5 мкМ и 35 нМ) и BMS345541 (1 мкМ) в течение 1 часа, а затем культивировали с ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ) или LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов. Экспрессию CD86 (A) и MHC-II (B) измеряли с помощью проточной цитометрии. (C) Секрецию TNF-α измеряли с помощью ELISA. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * P < 0,05 по сравнению с без ингибитора киназы.

    Akt Фосфорилирование в дендритных клетках, полученных из инотодиола и костного мозга

    Мы использовали вестерн-блоттинг для обнаружения фосфорилированных форм сигнальных молекул, p38 MAPK, Akt и NF-κB (28). LPS-BMDC, но не Inotodiol-BMDC, показали повышенное фосфорилирование ERK-1/2 и p38 MAPK (фиг. 10A). Экспрессия p-IKK-α / β, белков сигнального пути NF-κB, также была значительно увеличена в LPS-BMDC, но не в Inotodol-BMDC.Активированные IKK могут быстро фосфорилировать IκB-α, что приводит к его убиквитинированию и протеасомной деградации (35). ЛПС, но не инотодиол, индуцировал значительное снижение белка IκB-α через 20 мин стимуляции клеток. Для сравнения, инотодиол и ЛПС вызывали значительное увеличение белков p-Akt Ser473 и p-GSK-3β Ser9 в зависимости от времени, тогда как они не влияли на общие Akt и GSK-3β. Затем мы проверили, отменяет ли ингибитор PI3K фосфорилирование белка в Inotodiol-BMDC и LPS-BMDC.Увеличение p-Akt и p-GSK-3β в Inotodiol-BMDC и p-Akt и p-IKK-α / β в LPS-BMDC снижалось при предварительной обработке клеток вортманнином, тогда как уровень p-GSK -3β в LPS-BMDC не подвергался значительному влиянию вортманнина (фигура 10B). Поскольку только SB216763 в концентрации 5 мкМ увеличивал экспрессию CD86 в BMDC, мы проверили, будет ли вортманнин изменять экспрессию CD86 в BMDC, обработанных SB216763. Как показано на дополнительном рисунке S4A, вортманнин не смог блокировать увеличение экспрессии CD86, вызванное одним SB216763.Кроме того, на увеличение фосфорилирования GSK-3β в присутствии SB216763 не влиял вортманнин (дополнительный рисунок S4B), что позволяет предположить, что активация BMDC с помощью SB216763 в высокой концентрации не связана с путем PI3K / Akt. Таким образом, среди протестированных ингибиторов киназ ингибитор PI3K вызывал как ингибирование фосфорилирования Akt, так и повышающую регуляцию экспрессии CD86 в Inotodiol-BMDC, что позволяет предположить, что inotodiol активирует путь PI3K / Akt, но не пути p38 MAPK и NF-κB, чтобы индуцировать Экспрессия CD86 на BMDC.

    Фигура 10 Фосфорилирование Akt и GSK-3β в BMDC, обработанных инотодиолом. (A) BMDC (2 × 10 6 ) обрабатывали ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ) или LPS (1 мкг / мл) в течение указанных периодов. Затем образцы подвергали вестерн-блоттингу с использованием антифосфорилированных антител. β-Актин использовали в качестве контроля нагрузки. (B) BMDC (2 × 10 6 ) были предварительно обработаны (+ Вортманнин) или нет (-Вортманнин) с вортманнином (100 нМ) в течение 10 минут, а затем стимулированы ДМСО (0.01%) (нет), инотодиол (25 мкМ) или ЛПС (1 мкг / мл) в течение 20 мин. Образцы подвергали Вестерн-блоттингу, как на панели (A) . Данные представляют четыре независимых эксперимента.

    Обсуждение

    Инотодиол — это ланостерин, гидроксилированный по углероду 22 (26, 36). В этом исследовании инотодиол, но не ланостерин, значительно увеличивал экспрессию MHC-II и CD86 как в DC, так и в макрофагах, хотя увеличение MHC-I, MHC-II, CD86 и CD40 на Inotodiol-BMDC было ниже, чем на LPS- BMDC.Мы использовали ланостерал, аналог инотодиола и производное ланостерина с альдегидом у углерода 21. Ланостерал также значительно увеличивал экспрессию MHC-II и CD86 в DC, но его эффекты не были сопоставимы с эффектами инотодиола. Связь между структурой и функцией тритерпенов ланостана и механизмом действия инотодиола не выяснена. Сообщалось, что из трех тритерпеноидов ланостана только инотодиол ингибирует пролиферацию раковых клеток (16). Для сравнения, инотодиол и ланостерин, как сообщается, увеличивают активность тирозиназы, а также содержание меланина в клетках меланомы B16 (37).Кроме того, было показано, что активность другого тритерпенового ланостана, ганодерной кислоты, на рост и инвазивность раковых клеток связана с гидроксилированием его структуры, поскольку неактивное соединение не гидроксилировано (38), что позволяет предположить, что гидроксилирование ланостерола может быть ответственным за его сильную иммунологическую активность. Однако накопление эндогенного ланостерина, первого стерола в биосинтезе холестерина, в макрофагах, как было показано, проявляет антимикробную и противовоспалительную активность, что позволяет предположить, что ланостерин является эндогенным медиатором врожденных иммунных ответов (39).Таким образом, мы не можем исключить возможность того, что на метаболизм холестерина влияет экзогенное добавление инотодиола, которое было обнаружено только в грибе чага. С другой стороны, тритерпеноиды, включая ланостан, могут влиять на текучесть мембран (39).

    ЛПС-стимулированные зрелые ДК продуцируют большое количество провоспалительных и иммуномодулирующих цитокинов (40). В этом исследовании Inotodiol-BMDC не смогли продуцировать IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12p40 и TNF-α, тогда как LPS-BMDC продуцировали значительные количества этих цитокинов.Кроме того, низкая продукция TNF-α в BMDC, стимулированных инотодиолом, не регулируется ингибиторами GSK-3 и другими ингибиторами киназ. Эти результаты предполагают, что индуцированное инотодиолом созревание BMDC не зависит от провоспалительных цитокинов. В соответствии с этими данными, потеря адгезии E-кадгерина стимулировала DCs для усиления экспрессии костимулирующих молекул и MHC-II, но не вызывала высвобождение иммуностимулирующих цитокинов (34). Gotz et al. сообщили, что Plasmodium falciparum, инфицированные эритроцитами, также индуцировали необычный фенотип ДК с усиленной регуляцией костимулирующих молекул, но без секреции цитокинов, типичных для воспалительных реакций, таких как IL-1β, IL-6, IL-10 и TNF-α ( 41).Кроме того, гены, преимущественно активируемые инфицированных P. falciparum- эритроцитов, в основном участвуют в путях, связанных с синтезом липидов, таких как биосинтез холестерина (41). Таким образом, атипичное созревание ДК может быть вызвано клеточными условиями, некоторыми инфекционными агентами и природными продуктами, включая инотодиол.

    Повышенная экспрессия молекул клеточной поверхности в созревших DC, включая MHC и костимулирующие молекулы, имеет важное значение для праймирования наивных Т-клеток (42).Последующий адаптивный ответ на воспалительный ответ или толерантность зависит от продукции цитокинов. В этом исследовании Т-клетки, примированные либо Inotodiol-BMDC в MLR, либо OVA-импульсными Inotodiol-BMDC, продуцировали только IL-2, но не IL-12p40, IL-12p70 и IFN-γ. ИЛ-2 является ключевым фактором в стимулировании пролиферации активированных Т-клеток (43, 44). Таким образом, Inotodiol-BMDC участвуют в индукции секреции IL-2, что приводит к пролиферации Т-клеток. Продукция IL-2 в значительной степени ограничена активированными CD4 + Т-клетками (45), но также сообщалось, что активированные CD8 + Т-клетки и DC секретируют IL-2, хотя и на более низких уровнях, чем активированные CD4 . + Т-клеток (46, 47).Контакт CD4 + T-клеток с DC активирует эти T-клетки и приводит к повторной продукции IL-2 (48). Однако IL-2 вместе с Th-поляризующими цитокинами, продуцируемыми T-клетками и DCs, может примировать наивные Th-клетки для дифференцировки в разные клоны Th-клеток (49). Это исследование показало выработку IL-2 без поляризующих цитокинов посредством совместного культивирования Inotodiol-BMDCS и Т-клеток, предполагая, что дифференцировка совместно культивированных Т-клеток в определенный подтип может быть индуцирована цитокин-зависимым образом.Увеличение продукции IL-2 можно объяснить обнаружением того, что значительная активация MHC-I, MHC-II и костимулирующих молекул на Inotodiol-BMDC приводит к зрелой форме DC. Клетки T reg также, по-видимому, являются реципиентами сигналов IL-2, когда обычные Т-клетки, отвечающие на собственные или другие антигены, продуцируют IL-2 (50). Толерогенные Т-клетки индуцируются полузрелыми ДК, и эти Т-клетки выделяют иммуносупрессивные цитокины, такие как IL-10 и TGF-β (51). Однако продукция IL-10 и TGF-β не увеличивалась при совместном культивировании Т-клеток и Inotodiol-BMDC (данные не показаны).Более того, Inotodiol-BMDC и Т-клетки, совместно культивированные с Inotodiol-BMDC, были неспособны экспрессировать Foxp3 (данные не показаны).

    Инотодиол может вызывать созревание ДК посредством прямого воздействия на клетки или через высвобождение провоспалительных цитокинов, включая TNF-α, в аутокринном и паракринном паттернах (52). В этом исследовании инотодиол-BMDC не высвобождали TNF-α, IL-1β и другие цитокины, что позволяет предположить, что созревание DC было индуцировано прямым действием инотодиола на клетки. Активация постоянного тока может быть индуцирована через различных сигнальных путей.Как наблюдали в отношении продукции цитокинов, в обработанных инотодиолом DCs наблюдались различные сигнальные пути. Вестерн-блоттинг показал, что стимуляция LPS индуцировала активацию ERK-1/2, p38 MAPK и NF-κB, а также активацию Akt. Селективный ингибитор p38 MAPK, SB203580, ингибировал экспрессию CD86 в LPS-BMDC, но не в Inotodiol-BMDC. Более того, LPS, но не инотодиол, фосфорилировал p38 MAPK в BMDC. Эти результаты предполагают, что индуцированное инотодиолом созревание BMDC не зависит от активации p38 MAPK.Сообщалось, что созревание DC происходит за счет ингибирования GSK-3β (30). Однако в этом исследовании протестированные ингибиторы GSK-3β оказали отчетливое действие на индуцированную инотодиолом повышающую регуляцию экспрессии CD86 и MHC-II. SB415286 и SB216763 являются специфическими, мощными и селективными, проницаемыми для клеток, АТФ-конкурентными ингибиторами GSK-3 (33). Для сравнения известно, что LiCl ингибирует активность GSK-3, усиливая активность PI3K / Akt (53) и заменяя ионы Mg в сайте, отличном от сайта связывания АТФ GSK-3 (54).Один только SB216763 усиливал экспрессию CD86, как сообщалось ранее (30), и увеличивал экспрессию CD86 в Inotodiol-BMDC, тогда как LiCl и SB415286 не оказывали значительного влияния на экспрессию CD86 в Inotodiol-BMDC. Было показано, что ферментативно активный GSK-3 действует как важный положительный регулятор провоспалительных цитокинов (например, TNF-α, IL-1β и IL-6) (55). Однако SB216763 не влиял на продукцию TNF-α и IL-1β при различных концентрациях (данные не показаны). Таким образом, можно предположить, что GSK-3 напрямую не стимулируется инотодиолом.Активированный PI3K индуцирует фосфорилирование Akt, которое затем действует на широкий круг его мишеней (56). Мы обнаружили, что фосфорилирование Akt индуцировалось после обработки инотодиолом, а влияние на индуцированную инотодиолом экспрессию CD86 и фосфорилирование Akt сильно ослаблялось вортманнином, что указывает на то, что индуцированное инотодиолом созревание может частично зависеть от активации этого пути. Путь PI3K обычно способствует нетрадиционному созреванию DC (57). Мыши с нокаутом PI3K проявляли повышенные ответы Th 1 , включая продукцию IL-12, что позволяет предположить, что PI3K / Akt может действовать, оказывая влияние на контррегуляторные цепи продукции цитокинов (58).

    В цитоплазме существует NF-κB, связанный с IκB. После клеточной стимуляции специфическими индукторами IκB фосфорилируется комплексом IKK и разрушается протеасомой, а затем NF-κB перемещается в ядро, где регулирует транскрипцию нескольких генов (58). Анализ с ингибиторами IKK показал, что надежная активация NF-κB не обязательна для канонических особенностей стационарного созревания DC (59). В этом исследовании инотодиол не вызывал явных изменений в пути NF-κB, который, как хорошо известно, влияет на созревание обычных DC в ответ на LPS.Было показано, что инотодиол не влияет на LPS-индуцированную активацию NF-κB в клетках Raw264.7 (60). Кроме того, инотодиол не смог вызвать значительного увеличения любого из тестируемых цитокинов, тогда как LPS-индуцированная продукция провоспалительных цитокинов, включая TNF-α, IL-1β и IL-6, связана с передачей сигналов NF-κB. В отличие от его эффектов на экспрессию CD86 и MHC-II, эффекты инотодиола на продукцию цитокинов нельзя объяснить фосфорилированием Akt и GSK-3, поскольку ингибиторы этих путей не влияют на продукцию цитокинов с помощью Inotodiol-BMDC.Основываясь на этих результатах, мы предполагаем, что PI3K / Akt усиливает экспрессию CD86 и MHC-II, не влияя на продукцию провоспалительных цитокинов, независимо от NF-κB в Inotodiol-BMDC.

    В этом исследовании мы наблюдали in vitro эффектов инотодиола на созревание ДК и пролиферацию Т-клеток, а инъекция инотодиола мышам вызвала созревание ДК селезенки и секрецию ИЛ-2 в крови. Кроме того, введение инотодиола-BMDC индуцировало пролиферацию адоптивно перенесенных Т-клеток CD8 + у мышей-реципиентов и продукцию IL-2 без продукции других цитокинов, включая TNF-α и IL-12p40.Мы также наблюдали повышенную экспрессию внутриклеточного IL-2 в CD8 + Т-клетках после инъекции инотодиола in vivo , предполагая, что этот дифференциальный ответ на продукцию IL-2 между CD4 + и CD8 + Т-клетками может быть вызванные атипично созревшими ДК, хотя иммунологическая роль этого типа ДК in vivo еще не известна. Было высказано предположение, что продуцирующие IL-2 Т-клетки CD8 + обладают мощной способностью к размножению и формируют долговременную память (61).Продукция IL-2 проникающими в опухоль CD8 + Т-клетками связана с противоопухолевым иммунитетом (62), а IL-2, продуцируемый Т-клетками CD8 + , может стимулировать Treg (63). Однако Orozco Valencia et al. предположили, что низкие дозы ИЛ-2 эффективны при лечении аутоиммунных заболеваний, тогда как высокие дозы ИЛ-2 эффективны против меланом, потому что высокие дозы ИЛ-2 вызывают дисбаланс в регуляции иммунной системы за счет увеличения пролиферации эффекторных Т-рецепторов. ячейки (64). Таким образом, необходимы дальнейшие исследования, чтобы выяснить, могут ли инотодиол и инотодиол-активированные ДК оказывать иммунологические эффекты на моделях заболеваний, включая рак и аутоиммунные заболевания.

    В заключение, это исследование продемонстрировало атипичное созревание ДК под действием инотодиола, поскольку классическое созревание ДК обычно включает повышенную регуляцию поверхностных маркеров и секрецию провоспалительных цитокинов. Атипичное созревание Inotodiol-BMDC эффективно индуцировало пролиферацию Т-клеток и секрецию IL-2 без продукции других цитокинов.

    Заявление о доступности данных

    Исходные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы.Дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

    Заявление об этике

    Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом Институционального ухода за животными и их использования Университета Аджу (номер одобрения IACUC 2015-0028).

    Вклад авторов

    PM, J-HL и Y-SK провели иммунологические эксперименты. G-MS и Y-JS помогли с экспериментами in vivo . LP и VS очищали инотодиол. MR и J-YK руководили исследованием и написали статью.Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Эта работа была поддержана грантом Корейского проекта исследований и разработок в области технологий здравоохранения через Корейский институт развития индустрии здравоохранения (KHIDI), финансируемого Министерством здравоохранения и социального обеспечения Республики Корея (HI16C0992 и HR16C0001), а также Проект повышения потенциала фундаментальных научных исследований через грант Корейского института фундаментальных наук (Национальный исследовательский центр и центр оборудования), финансируемый Министерством образования (2019R1A6C1010003).

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2021.650841/full#supplementary-material

    Дополнительный рисунок 1 | Инотодиол увеличивает экспрессию CD86 в макрофагах и Raw264.7 клеток in vitro . (A) Перитонеальные макрофаги (2 × 10 5 / мл), выделенные из мышей C57BL / 6, очищали микрогранулами, связанными с антителами против F4 / 80, и обрабатывали ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ) или ЛПС (1 мкг / мл) в течение 24 часов. Экспрессию CD86 измеряли проточной цитометрией с использованием антитела против CD86, конъюгированного с eFluor 450. Типичные гистограммы показывают экспрессию CD86 в каждой группе ( n = 3). (B) Необработанные клетки 264,7 (2 × 10 5 / мл) обрабатывали ДМСО (0.01%) (нет), инотодиол (25 мкМ) или ЛПС (1 мкг / мл) в течение 24 часов. Экспрессию CD86 определяли методом проточной цитометрии. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * p < 0,05, по сравнению с отсутствием.

    Дополнительный рисунок 2 | Влияние ланостерина, инотодиола и ланостерала на экспрессию MHC-II, CD86 и CD40 в BMDC. BMDC (2 × 10 5 ) стимулировали ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ), ланостерином (25 мкМ) или ланостералом (25 мкМ) в течение 24 часов. Выражения CD86 (A) , MHC-II (B) и CD40 (C) измеряли с помощью проточной цитометрии.Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). Статистическая значимость была проверена между двумя различными условиями.

    Дополнительный рисунок 3 | Производство цитокинов перитонеальными макрофагами, обработанными инотодиолом, и клетками Raw264.7. Перитонеальные макрофаги (A) и клетки Raw264.7 (B) (2 × 10 5 ) обрабатывали ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ) или LPS (1 мкг / мл. ) в течение 24 ч ( n = 3). Количество цитокинов или хемокинов, секретируемых в супернатантах культур, определяли с использованием набора мышиных цитокинов (A) и измеряли с помощью ELISA (B) .Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение ( n = 3). * p < 0,001, по сравнению с отсутствием.

    Дополнительный рисунок 4 | Влияние вортманнина на экспрессию CD86 и фосфорилирование GSK-3β в BMDC, обработанных SB216763. (A) BMDC (2 × 10 5 ) были предварительно обработаны (+ Вортманнин) или нет (-Вортманнин) с вортманнином (100 нМ) в течение 1 ч, а затем культивированы с ДМСО в качестве контроля носителя (0,01%) (Нет ), инотодиол (25 мкМ), LPS (1 мкг / мл) или SB216763 (35 нМ и 5 мкМ) в течение 24 часов ( n = 3).Экспрессию CD86 измеряли с помощью проточной цитометрии. (B) BMDC (2 × 10 6 ) были предварительно обработаны (+ Вортманнин) или нет (-Вортманнин) с вортманнином (100 нМ) в течение 1 ч, а затем стимулированы ДМСО (0,01%) (Нет), инотодиолом (25 мкМ), LPS (1 мкг / мл) или SB216763 (35 нМ и 5 мкМ) в течение 20 мин. Затем образцы подвергали вестерн-блоттингу с использованием антител против p-GSK-3β ser9 и анти-GSK-3β. Экспрессия белка p-GSK-3β была количественно определена денситометрией и стандартизована для GSK-3β с использованием ImageJ.Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов. * P < 0,05 по сравнению с отсутствием ** P < 0,05 по сравнению с отсутствием вортманнина.

    Ссылки

    1. Саллусто Ф., Селла М., Даниэли С., Ланзавеккья А. Дендритные клетки используют макропиноцитоз и рецептор маннозы для концентрации макромолекул в компартменте класса II главного комплекса гистосовместимости: подавление цитокинами и бактериальными продуктами. J Exp Med (1995) 182: 389–400. DOI: 10.1084 / jem.182.2.389

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    2. Саллюсто Ф, Ланзавекки А. Эффективная презентация растворимого антигена культивированными дендритными клетками человека поддерживается фактором, стимулирующим колонии гранулоцитов / макрофагов, плюс иутерлейкин 4 и подавляется фактором некроза опухоли α. J Exp Med (1994) 179: 1109–18. doi: 10.1084 / jem.179.4.1109

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    3. Инба К., Инаба М., Романи Н., Ая Х, Дегучи М., Икехара С. и др.Генерация большого количества дендритных клеток из культур костного мозга мышей с добавлением колониестимулирующего фактора гранулоцитов / макрофагов. J Exp Med (1992) 176: 1693–702. doi: 10.1084 / jem.176.6.1693

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4. Далод М., Челби Р., Малиссен Б., Лоуренс Т. Созревание дендритных клеток: функциональная специализация посредством специфичности передачи сигналов и транскрипционного программирования. EMBO J (2014) 33: 1104–16.doi: 10.1002 / embj.201488027

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    10. Дудек А.М., Мартин С., Гарг А.Д., Агостинис П. Незрелые, полузрелые и полностью зрелые дендритные клетки: к интерфейсу DC-раковые клетки, который увеличивает противоопухолевый иммунитет. Front Immunol (2013) 4: 1–14. doi: 10.3389 / fimmu.2013.00438

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11. Эльсайед Э.А., Эль-Эншаси Х., Вадаан МАМ, Азиз Р. Грибы: потенциальный природный источник противовоспалительных соединений для медицинских целей. Медиаторы воспаления (2014) 2014: 805841. doi: 10.1155 / 2014/805841

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12. Гламочлия Дж., Чирич А., Николич М., Фернандес А., Баррос Л., Калхела Р. К. и др. Химическая характеристика и биологическая активность чаги ( Inonotus obliquus ), лекарственного «гриба». Дж. Этнофармакол (2015) 162: 323–32. doi: 10.1016 / j.jep.2014.12.069

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    13.Zhao F, Mai Q, Ma J, Xu M, Wang X, Cui T и др. Тритерпеноиды из Inonotus obliquus и по их противоопухолевой активности. Фитотерапия (2015) 101: 34–40. DOI: 10.1016 / j.fitote.2014.12.005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14. Дуру К.С., Ковалева Е.Г., Данилова И.Г., ван дер Бейл П. Фармакологический потенциал и возможные молекулярные механизмы действия Inonotus obliquus из доклинических исследований. Phyther Res (2019) 33: 1966–80.doi: 10.1002 / ptr.6384

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Наката Т., Ямада Т., Таджи С., Охиши Х., Вада С.И., Токуда Х. и др. Определение структуры иноноцуоксидов А и В и in vivo противоопухолевой промотирующей активности инотодиола из склероций Inonotus obliquus . Bioorg Med Chem (2007) 15: 257–64. doi: 10.1016 / j.bmc.2006.09.064

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Номура М., Такахаши Т., Уэсуги А., Танака Р., Кобаяши С.Инотодиол, тритерпеноид ланостана, из Inonotus obliquus ингибирует пролиферацию клеток посредством каспазо-3-зависимого апоптоза. Anticancer Res (2008) 28: 2691–6.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    17. Ryu SY, Lee CK, Ahn JW, Lee SH, Zee OP. Противовирусная активность производных тритерпеноидов. Arch Pharm Res (1993) 16: 339–42. doi: 10.1007 / BF02977528

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Ríos JL, Recio MC, Máñez S, Giner RM.Натуральные тритерпеноиды как противовоспалительные средства. Stud Nat Prod Chem (2000) 22: 93–43. doi: 10.1016 / S1572-5995 (00) 80024-1

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19. Nguyen TMN, Le HS, Le BV, Kim YH, Hwang I. Противоаллергический эффект инотодиола, тритерпеноида ланостана из гриба чага, посредством избирательного ингибирования функции тучных клеток. Int Immunopharmacol (2020) 81: 106244. doi: 10.1016 / j.intimp.2020.106244

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21.Du D, Zhu F, Chen X, Ju X, Feng Y, Qi LW и др. Быстрое выделение и очистка инотодиола и траметеноловой кислоты из Inonotus obliquus с помощью высокоскоростной противоточной хроматографии с испарительной детекцией светорассеяния. Phytochem Anal (2011) 22: 419–23. doi: 10.1002 / pca.1297

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22. Naik SH, Sathe P, Park HY, Metcalf D, Proietto AI, Dakic A, et al. Развитие подтипов плазмацитоидных и обычных дендритных клеток из единичных клеток-предшественников, полученных in vitro и in vivo . Nat Immunol (2007) 8: 1217–26. doi: 10.1038 / ni1522

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23. Сон М.Г., Хван С.И., Пак Джи, Юн С., Пэ Х.Р., Квак Дж.Й. Роль аквапорина 3 в развитии, подтипах и активации дендритных клеток. Mol Immunol (2011) 49: 28–37. doi: 10.1016 / j.molimm.2011.07.015

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Чжоу В., Кан Х.С., О’Грейди М., Чемберс К.М., Даббелс Б., Мелквист П. и др.CellTrace ™ Far Red и CellTracker ™ Deep Red — долгосрочное отслеживание живых клеток для проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии. Дж. Биологические методы (2016) 3: e38. doi: 10.14440 / jbm.2016.113

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Куа Б.Дж., Уоррен Х.С., округ Колумбия. Мониторинг пролиферации лимфоцитов in vitro, и in vivo, , с помощью внутриклеточного флуоресцентного красителя сукцинимидилового эфира диацетата карбоксифлуоресцеина. Nat Protoc (2007) 2: 2049–56.doi: 10.1038 / nprot.2007.296

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26. Де Райнах-Хирцбах Ф., Ориссон Г. Структура л’Инотодиола (Obliquol), Triterpene Tetracyclique. Тетраэдр (1972) 247: 2259–66. doi: 10.1016 / S0040-4020 (01) 93570-7

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Ardeshna K, Pizzey AR, Devereux S, Khwaja A. Киназа PI3, киназа p38 SAP и пути передачи сигнала NF-κB участвуют в выживании и созревании стимулированных липополисахаридом дендритных клеток человека, полученных из моноцитов. . Кровь (2000) 96: 1039–46. doi: 10.1182 / blood.V96.3.1039

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Невес Б.М., Круз М.Т., Франсиско В., Гарсия-Родригес К., Сильвестр Р., Кордейро-да-Силва А. и др. Различная роль PI3-киназы, MAPK и NF-κB в манипулировании профилем поляризации Th2 / Th3 цитокинов / хемокинов дендритных клеток. Mol Immunol (2009) 46: 2481–92. doi: 10.1016 / j.molimm.2009.05.021

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29.Берк Дж. Р., Паттоли М. А., Грегор К. Р., Брассил П. Дж., Макмастер Дж. Ф., Макинтайр К. В. и др. BMS-345541 представляет собой высокоселективный ингибитор киназы IκB, который связывается в аллостерическом сайте фермента и блокирует NF-κB-зависимую транскрипцию у мышей. J Biol Chem (2003) 278: 1450–6. doi: 10.1074 / jbc.M209677200

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Алессандрини А., Хасет С., Фрай М., Миядзима М., Колвин Р. Б., Уильямс В. В. и др. Созревание дендритных клеток происходит за счет ингибирования GSK-3β. Cell Immunol. (2011) 270: 114–25. doi: 10.1016 / j.cellimm.2011.04.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31. Мартин М., Рехани К., Джоп Р., Михалек С. Производство цитокинов, опосредованное толл-подобными рецепторами, по-разному регулируется киназой 3 гликогенсинтазы. Nat Immunol (2005) 6: 777–84. doi: 10.1038 / ni1221

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    33. Coghlan MP, Culbert AA, Cross DAE, Corcoran SL, Yates JW, Pearce NJ, et al.Селективные низкомолекулярные ингибиторы киназы-3 гликогенсинтазы модулируют метаболизм гликогена и транскрипцию генов. Chem Biol (2000) 7: 793–803. doi: 10.1016 / S1074-5521 (00) 00025-9

    PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Цзян А., Блум О., Оно С., Цуй В., Унтернаерер Дж., Цзян С. и др. Нарушение адгезии, опосредованной Е-кадгерином, вызывает функционально отличный путь созревания дендритных клеток. Иммунитет (2007) 27: 610–24. DOI: 10.1016 / j.immuni.2007.08.015

    PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Poyser JP, de Reinach Hirtzbach F, Ourisson G. Стереоспецифический синтез инотодиола 3β, 22R-дигидроксиланоста-8,24-диена. Тетраэдр (1974) 30: 977–86. doi: 10.1016 / S0040-4020 (01) 97484-8

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Янь Ц.Ф., Ян Й., Тянь Ф.Х., Мао ХХ, Ли И, Ли CT. Ингибирующие и ускоряющие эффекты Inonotus obliquus на активность тирозиназы и образование меланина в клетках меланомы B16. Доказательное дополнение Альтернативная медицина (2014) 2014: 259836. doi: 10.1155 / 2014/259836

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38. Цзян Дж., Гриб Б., Тьягараджан А., Слива Д. Ганодерные кислоты подавляют рост и инвазивное поведение клеток рака груди, модулируя передачу сигналов AP-1 и NF-κB. Int J Mol Med (2008) 21: 577–84. doi: 10.3892 / ijmm.21.5.577

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    39. Аральди Э., Фернандес-Фуэртес М., Канфран-Дуке А., Тан В., Клайн Г. В., Мадригал-Матуте Дж. И др.Ланостерол модулирует TLR4-опосредованные врожденные иммунные ответы в макрофагах. Cell Rep (2017) 19: 2743–55. doi: 10.1016 / j.celrep.2017.05.093

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    40. Верхассельт В., Буэленс С., Виллемс Ф., Гроот Д., Хеффнер-Кавайон Н., Гольдман М. Бактериальный липополисахарид стимулирует выработку цитокинов и экспрессию костимулирующих молекул дендритными клетками периферической крови человека. J Immunol (1997) 158: 2919-25.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    41. Гётц А., Тан М.С., Тай М.К., Арама С., Онгойба А., Думтабе Д. и др. Атипичная активация дендритных клеток Plasmodium falciparum . Proc Natl Acad Sci U S A (2017) 114: E10568–77. DOI: 10.1073 / pnas.1708383114

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    42. Banchereau J, Briere F, Caux C, Davoust J, Lebecque S, Liu Y и др. Иммунобиология дендритных клеток. Annu Rev Immunol (2000) 18: 767–811.doi: 10.1146 / annurev.immunol.18.1.767

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    46. Грануччи Ф., Виззарделли С., Павелка Н., Феу С., Персико М., Вирци Е. и др. Индуцируемая продукция IL-2 дендритными клетками, выявленная с помощью глобального анализа экспрессии генов. Nat Immunol (2001) 2: 882-8. doi: 10.1038 / ni0901-882

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    48. Tong D, Zhang L, Ning F, Xu Y, Hu X, Shi Y. Контактно-зависимая доставка IL-2 дендритными клетками к CD4 T-клеткам в фазе сокращения способствует их долгосрочному выживанию. Protein Cell (2020) 11: 108–23. doi: 10.1007 / s13238-019-00662-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    50. Аббас А.К., Тротта Э., Симеонов Д.Р., Марсон А., Блюстоун Дж. Возвращаясь к IL-2: биология и терапевтические перспективы. Sci Immunol (2018) 3: aat1482. doi: 10.1126 / sciimmunol.aat1482

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    52. Jin JO, Park HY, Xu Q, Park JI, Звягинцева Т., Стоник В.А. и др. Лиганд скавенджер-рецептора класса А косвенно индуцирует созревание дендритных клеток крови человека через продукцию фактора некроза опухоли-α. Кровь (2009) 113: 5839–47. doi: 10.1182 / blood-2008-10-184796

    PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    53. Chalecka-Franaszek E, Chuang DM. Литий активирует серин / треонинкиназу Akt-1 и подавляет индуцированное глутаматом ингибирование активности Akt-1 в нейронах. Proc Natl Acad Sci U S. A (1999) 96: 8745–50. doi: 10.1073 / pnas.96.15.8745

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    55. Hoffmeister L, Diekmann M, Brand K, Huber R.GSK3: способствование уравновешиванию киназ и разрешение воспаления. Ячейки (2020) 9: 820. doi: 10.3390 / cell20

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    56. Vanhaesebroeck B, Guillermet-Guibert J, Graupera M, Bilanges B. Новые механизмы передачи сигналов PI3K, специфичных для изоформ. Nat Rev Mol Cell Biol (2010) 11: 329–41. doi: 10.1038 / nrm2882

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    57. Fukao T, Tanabe M, Terauchi Y, Ota T, Matsuda S, Asano T, et al.P13K-опосредованная регуляция продукции IL-12 в DC с отрицательной обратной связью. Nat Immunol (2002) 3: 875–81. doi: 10.1038 / ni825

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    59. Вандер Лугт Б., Ридделл Дж., Хан А.А., Хакни Дж. А., Леш Дж., ДеВосс Дж. И др. Транскрипционные детерминанты толерогенных и иммуногенных состояний во время созревания дендритных клеток. J Cell Biol (2017) 216: 779–92. doi: 10.1083 / jcb.201512012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    60.Ма Л., Чен Х, Донг П., Лу X. Противовоспалительная и противораковая активность экстрактов и соединений гриба Inonotus obliquus . Food Chem (2013) 139: 503. doi: 10.1016 / j.foodchem.2013.01.030

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    61. Редекер А., Велтен С.П., Баерт М.Р., Влоеманс С.А., Тимессен М.М., Стаал Ф.Дж. и др. Количество аутокринного IL-2 определяет потенциал роста CD8 + Т-клеток. J Immunol (2015) 195: 4792–801.doi: 10.4049 / jimmunol.1501083

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    62. Spranger S, Koblish HK, Horton B, Scherle PA, Newton R, Gajewski TF. Механизм отторжения опухоли с помощью дублетов CTLA-4, PD-1 / PD-L1 или блокады IDO включает восстановление продукции IL-2 и пролиферацию CD8 (+) Т-клеток непосредственно в микроокружении опухоли. J Иммунный рак (2014) 2: 3. doi: 10.1186 / 2051-1426-2-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    63.МакНалли А., Хилл Г.Р., Спарвассер Т., Томас Р., Степто Р.Дж. CD4 + CD25 + регуляторные Т-клетки контролируют дифференцировку эффекторов CD8 + Т-клеток, модулируя гомеостаз IL-2. Proc Natl Acad Sci USA (2011) 108: 7529–34. DOI: 10.1073 / pnas.1103782108

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    64. Ороско Валенсия А., Камарго Книрш М., Суавиньо Ферро Е., Антонио Стефано М. Интерлейкин-2 как иммунотерапевтическое средство при аутоиммунных заболеваниях. Int Immunopharmacol (2020) 81: 106296.doi: 10.1016 / j.intimp.2020.106296

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Полисахариды гриба чага (Inonotus obliquus) проявляют генопротекторные эффекты у эмбрионов рыбок данио (Danio rerio), подвергшихся воздействию УФ-В, за счет скоординированной экспрессии генов репарации ДНК

    https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2021.e06003Get rights и содержание

    Abstract

    Гриб чага — один из многообещающих полезных грибов, произрастающих в более холодных частях Северного полушария.Сообщалось, что полисахариды чаги (ВГД) усиливают иммунный ответ и снижают окислительный стресс во время развития. Однако влияние ВГД на генотоксичность модельных организмов еще предстоит выяснить. В этом исследовании ВГД было извлечено методом экстракции горячей водой с последующим анализом методом ГХ. Эмбрионы рыбок данио (12 ч после оплодотворения, hpf) подвергались кратковременному воздействию УФ-В (12 Дж / м 2 / с, 305–310 нм) в течение 10 с с использованием камеры для УФ-гибридизации с последующей обработкой ВГД (2,5 мг / мл) при 24 hpf на срок до 7 дней после оплодотворения (dpf).Генотоксические эффекты оценивали с помощью окрашивания акридиновым оранжевым, щелочного анализа комет и qRT-PCR для скрининга генов репарации ДНК. Значительное уменьшение повреждений ДНК и улучшение деформированных структур у рыбок данио, обработанных ВГД, подвергшихся воздействию УФВ (p <0,05), наблюдалось при 5 dpf и после этого. Относительная экспрессия мРНК XRCC-5, XRCC-6, RAD51, и GADD45 была значительно повышена, тогда как p53 и BAX были подавлены у рыбок данио, обработанных ВГД, подвергшихся воздействию УФВ, по сравнению с рыбками данио, подвергшимися воздействию УФВ.Анализ ELISA выявил значительно сниженную экспрессию XRCC5 и RAD51 у подвергшихся воздействию УФ-В по сравнению с обработанными ВГД УФ-В и контрольными рыбками данио (7 dpf). Однако уровни p53 и BAX были высокими у рыбок данио, подвергшихся воздействию УФ-В, что указывает на более высокий уровень апоптоза. Анализ пути продемонстрировал скоординированную регуляцию генов репарации ДНК; p53 играет ключевую роль в регуляции экспрессии BAX, тем самым способствуя апоптозу у рыбок данио, подвергшихся воздействию UVB. В целом, лечение ВГД улучшило генотоксические эффекты у рыбок данио, подвергшихся воздействию УФ-В, за счет повышенной экспрессии генов репарации ДНК, что способствовало нормальному развитию.Исследование показало эффективность ВГД в смягчении УФ-индуцированного повреждения ДНК у рыбок данио.

    Ключевые слова

    Полисахариды чаги

    Рыбки данио

    UVB

    Гены восстановления ДНК

    Генотоксичность

    Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

    © 2021 Автор (ы). Опубликовано Elsevier Ltd.

    Рекомендуемые статьи

    Цитирующие статьи

    Американский трипаносомоз (болезнь Шагаса): нераспознанная причина инсульта

    Американский трипаносомоз, болезнь Шагаса (БК) является важной проблемой общественного здравоохранения и основной причиной кардиомиопатия в Южной Америке.Возбудитель Trypanosoma cruzi широко распространен в Южной и Центральной Америке, вплоть до южного Техаса. 1, 2 От шестнадцати до восемнадцати миллионов человек страдают хронической инфекцией, приводящей к 50 000 смертей ежегодно. Хотя до 8% населения Южной Америки являются серопозитивными, только у 10–30% из них разовьются симптомы заболевания. Эмиграция миллионов людей из стран, в которых T cruzi является эндемическим для развитых стран, увеличила риск незаподозренной БК, и при переливании передается T cruzi . 3, 4

    Необратимое повреждение сердца может появиться через 10–20 лет после заражения чагасом. Основными проявлениями болезни сердца являются дилатация сердца, сердечная недостаточность, аритмия и остановка сердца. 5, 6 Сердечные заболевания повышают риск возникновения ишемического инсульта. 7 Клиническая частота цереброваскулярных осложнений при БК ранее не описывалась, хотя патологоанатомические исследования показали, что 9–36% пациентов с кардиомиопатией Шагаса имеют признаки церебрального инфаркта. 8– 10 Выявление и контроль факторов риска кардиоэмболического инсульта является краеугольным камнем стратегий профилактики инсульта при БК. 11

    Целью нашего исследования было проанализировать важность хронической БК как причины ишемического инсульта у населения Бразилии. Сопутствующие сосудистые факторы риска (VRF) были проанализированы, чтобы определить переменные, которые могут предсказать инсульт как при хронической, так и при латентной формах CD. Повышение осведомленности о любой такой важной взаимосвязи может также привести к рассмотрению диагноза ранее невыявленных случаев БК в группах риска с ишемическим инсультом.

    МЕТОДЫ

    Мы включили в это исследование всех пациентов, госпитализированных в отделения неврологии и реабилитации больницы Сара, в Бразилиа, Бразилия, в период с января 1999 г. по июль 2001 г. с клиническим диагнозом ишемического инсульта и положительной серологией на чагаз. Мы определили наличие CD у пациента, перенесшего инсульт, когда и иммунофлюоресценция, и гемагглютинация были положительными. В исследуемую группу были включены только пациенты с инсультом с хронической или латентной БК.

    Диагноз инсульта подтвержден клиническими и / или радиологическими данными в соответствии с критериями банка данных об инсульте. 12 Мы приняли критерии классификации подтипа острого ишемического инсульта, использованные в многоцентровом клиническом исследовании ORG 10172 по лечению острого инсульта (TOAST). 13 Оксфордширская классификация 14 использовалась для определения места инсульта.

    Демографические переменные включали возраст, пол, перенесенный инсульт в анамнезе, осведомленность пациента об истории болезни CD, семейный анамнез CD и регион происхождения пациента.Собранные данные включали VRF, местоположение поражения головного мозга, диагностический подтип инсульта, данные электрокардиографии и эхокардиографии. Всем пациентам выполняли электрокардиографию, эхокардиограмму, рентгенограмму грудной клетки и компьютерную томографию головного мозга. Дальнейшие проанализированные вспомогательные исследования включали магнитно-резонансную томографию головного мозга (22% пациентов), каротидную допплерографию (72,8%) и транскраниальную допплерографию (37%).

    Был разработан план описательного анализа поперечного сечения. Собранные данные по VRF сравнивали с контрольной группой пациентов, не страдающих чагасическим инсультом.StatView 4.02 для Macintosh использовался для получения описательной статистики, точного критерия Фишера, теста χ 2 и анализа измерений дисперсии. Двустороннее значение вероятности менее 0,05 считалось статистически значимым.

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Всего с января 1999 г. по июль 2001 г. было госпитализировано 966 пациентов с инсультом (432 женщины, 534 мужчины; средний возраст 58,5 лет). Серологические результаты на БК были доступны у 557 пациентов; 24,4% этих пациентов (136 пациентов) имели положительную серологию на чагас.Эти 136 пациентов исследуемой группы состояли из 72 женщин (53%) и 64 мужчин (47%) со средним возрастом 56 лет, в диапазоне от 17 до 85. Шестьдесят девять процентов были моложе 65 лет. Диагноз БК был установлен только после инсульта у 38% исследуемых пациентов. Точно так же у трети пациентов с инсультом без известных VRF (8 из 24) была диагностирована CD после инсульта. Семейный анамнез БК имел место у 38% пациентов. Хроническая кишечная форма была выявлена ​​у 20% пациентов (мегаэзофагус 8%, мегаколон 8% и оба 4%).

    Рентгенография грудной клетки выявила аномалии у 33% пациентов, в основном кардиомегалию. Каротидная допплерография была сделана 74% пациентов, из которых 63% были нормальными, 24% показали атероматозные бляшки на бифуркации, 11% имели тромбоз сонной артерии и 2% пациентов имели стеноз более 50%. Сосудистая эпилепсия за время наблюдения развилась у 14%.

    Факторы риска сосудов

    Частота VRF у пациентов с чагасическим инсультом сравнивалась с контрольной группой из 239 пациентов, не страдающих чагасическим инсультом (104 женщины и 135 мужчин, средний возраст 57 лет.4 года). Этническая принадлежность обеих групп была неразличима. Значительно более высокая частота гипертонии, сахарного диабета и употребления табака наблюдалась в группе без инсульта. Ранее перенесенный инсульт и кардиомиопатия были значительно выше в группе с инсультом Шагас (таблица 1).

    Таблица 1

    Факторы сосудистого риска в исследуемой популяции

    Аномалии электрокардиографа и эхокардиографа

    Отклонения от нормы электрокардиографа встречались у 82% пациентов с БК.Блокада правой ножки пучка Гиса наблюдалась в 39,5% случаев, за ней следовала блокада левой передней фасцикулярной ткани (36%). Из 67 пациентов, которым проводился холтеровский мониторинг, у 48 пациентов (72%) наблюдались частые желудочковые экстрасистолы. В общей сложности 127 пациентам (94%) была сделана эхокардиограмма либо только трансторакально (63%), либо только чреспищеводно (0,7%), либо и то, и другое (30%). Нормальная эхокардиограмма была получена у 21 пациента (17%). Эхокардиограммы не были получены у восьми, из которых две не были выполнены из-за неадекватного грудного окна.Наиболее частым результатом эхокардиографии была диастолическая дисфункция левого желудочка (LVD). Апикальная аневризма возникла в 16% случаев. Это было чаще среди более молодых пациентов с инсультом, страдающих чагасом (в среднем 52 года), и у пациентов без VRF (26%).

    Не было статистических различий по возрасту или полу у пациентов с инсультом CD и сердечно-сосудистыми заболеваниями, включая апикальную аневризму шагаса, LVD, блокаду пучка Гиса, гипертензию, ишемическую кардиомиопатию и сердечную недостаточность. Дилатационная кардиомиопатия, когда она присутствовала, возникла в значительно более молодом возрасте (средний возраст 51 год по сравнению с 58 годами; p = 0.012). Предыдущий анамнез инсульта не был связан ни с наличием VRF, ни с наличием аритмий.

    Характеристики хода

    В соответствии с критериями TOAST мы определили 52% пациентов с инсультом CD как кардиоэмболию (с очевидным источником эмбола), 9% как атеротромботический инсульт, 2% как инсульт мелких сосудов и 37% как инсульт неустановленной причины (таблица 2). . В эту последнюю группу мы также включили пациентов с инсультом с нормальным каротидным допплером, наличием гипертонии и данными эхохардиографа, такими как LVD.Наиболее часто поражалась сосудистая территория средней мозговой артерии (71%), за ней следовали инфаркты базальных ганглиев или внутренней капсулы (15%). Тихие инфаркты наблюдались у 25 пациентов. Инсульты в области лентикулоэстриатных артерий были наиболее частой ишемической зоной у больных с тихими инфарктами.

    Таблица 2

    Характеристики инсульта в популяции CD-инсульта

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Хроническая кардиомиопатия, поражающая 30% пациентов, является наиболее частой клинической формой БК.Его начало наступает в среднем через 30 лет после первоначального заражения. 15, 16 Кардиомиопатия CD характеризуется застойной сердечной недостаточностью, внезапной сердечной смертью, дефектами внутрижелудочковой проводимости, аритмиями и тромбоэмболией. 17– 22 Шагасический эмболический инсульт клинически неотличим от инсульта другой этиологии. 23

    У наших пациентов были выявлены три области, представляющие особый интерес. Во-первых, высокая частота предшествующего ишемического инсульта (22%) отмечена у наших пациентов с инсультом CD.Во-вторых, более высокая частота кардиопатии в группе инсульта CD по сравнению с инсультом без чагаса. Таким образом, профилактика последующего инсульта с помощью длительной антикоагуляции может показаться показанной, когда у пациентов с инсультом очевидна шагасическая кардиомиопатия. Патологоанатомические исследования показали инфаркт мозга у 9–36% пациентов с кардиомиопатией CD. 8– 10 Следовательно, может возникнуть необходимость в первичной профилактике у всех пациентов с кардиомиопатией CD.

    В-третьих, высокая частота (19% CD) пациентов с инсультом без каких-либо явных VRF.Около 37% пациентов с инсультом CD неустановленной причины имели нормальные эхокардиограммы, нормальный каротидный доплер и отсутствие связанных VRF. Это открытие может быть объяснено невыявленным неагасическим сердечно-сосудистым заболеванием. Однако оставшиеся 63,3% пациентов с инсультом CD неустановленной причины обычно имели только один связанный VRF, обычно гипертензию или LVD. Таким образом, кажется, что малочисленность VRF в этой группе может указывать на существование других возможных механизмов.

    Действуя аналогично васкулиту, активному в патогенезе шагасовой кардиомиопатии, недавно сообщенный церебральный васкулит у пациентов с БК 24 может объяснить это ранее недооцененное явление.Инфекция миокарда T cruzi активирует киназу, регулируемую внеклеточными сигналами, протеин-активатор-1, эндотелин-1 и циклины. 24 Этот возможный этиологический механизм может потребовать изучения антикоагулянтов у больных с инсультом, страдающих диабетом, даже при отсутствии VRF.

    Еще 26% пациентов без VRF поступили с апикальной аневризмой. Бессимптомная апикальная аневризма могла играть определенную роль в этиологии инсульта у этих пациентов, которые в противном случае не имели клинических симптомов кардиопатии.

    Мы специально не изучали геморрагический инсульт у пациентов с БК. Связь васкулита Шагаса с возникновением инсульта требует дальнейшего изучения ввиду непропорционально высокой частоты инсультов неустановленной причины при БК. Продольные исследования VRF необходимы для количественной оценки риска рецидива и долгосрочной смертности после инсульта. Почему у серопозитивных пациентов без VRF развивается инсульт, может быть связано с функцией прокоагулянтных факторов, таких как антикардиолипин, дрепаноцитоз или дефицит C, S.

    Меры ВОЗ по борьбе с домашним переносчиком, ответственным за передачу T cruzi , оказали огромное влияние на сокращение новых случаев БК в Конусе Южной Америки. Однако длительный латентный период перед хронической стадией сохранит БК в качестве важной проблемы общественного здравоохранения на десятилетия. Включение CD в дифференциальную диагностику инсульта у пациентов южноамериканского происхождения важно для распознавания и предотвращения дальнейших осложнений CD.

    ССЫЛКИ

    1. Кирхгоф LV . Трипаносома видов (американский трипаносомоз, болезнь Шагаса): биология трипаносом. В: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R, eds. Принципы и практика инфекционных болезней . Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон, 1995: 2442–50.

    2. Cegielsk JP , Durack DT. Трипаносомоз. В: Scheld WM, Whitley RJ, Durack DT, eds. Инфекции центральной нервной системы . Филадельфия: Липпинкотт-Рэйвен 1997: 807–29.

    3. Кирхгоф LV . Американский трипаносомоз (болезнь Шагаса): тропическое заболевание, распространенное сейчас в Соединенных Штатах. N Engl J Med 1993; 329: 639–44.

    4. Leiby DA , Rentas FJ, Nelson KE, et al. Свидетельства инфекции Trypanosoma cruzi (болезнь Шагаса) среди пациентов, перенесших операцию на сердце.Circulation 2000; 102: 2978–82.

    5. Rassi A Jr , Rassi A, маленький туалет. Болезнь сердца Шагаса. Clin Cardiol 2000; 23: 883–9.

    6. Умезава ES , Stolf AMS, Corbett CEP, и др. . Болезнь Шагаса. Ланцет 2001; 357: 797–9.

    7. Sacco RL . Факторы риска, исходы и подтипы ишемического инсульта.Неврология 1997; 49 (приложение 4): 39–44.

    8. Pitella JE , Meneguette C, Barbosa AJ. Гистопатологическое и иммуногистохимическое исследование мозга и сердца при хронической сердечной форме болезни Шагаса. Arq Neuropsiquiatr 1993; 51: 8–15.

    9. de Queiroz AC . Estudo anatomopatológico do encéfalo na forma crónica da doença de Chagas. Преподобный Пэт Троп 1978; 7: 134–45.

    10. Pitella JE . Ишемические церебральные изменения при хронической чагасической кардиопатии. Arq Neuropsiquiatr 1984; 42: 105–15.

    11. Carod Artal FJ , Мело М, Варгас AP. Ictus cardioembólico en la enfermedad de Chagas. Rev Neurol2001; 33: 311–15.

    12. Foulkes MA , Wolf PA, Price TR, et al .Банк данных об инсульте: дизайн, методы и исходные характеристики. Stroke1988; 19: 547–54.

    13. Adams HP Jr , Bendixen BH, Kapelle LJ, и др. . Классификация подтипа острого ишемического инсульта: определения для использования в многоцентровом клиническом исследовании. Stroke1993; 24: 35–41.

    14. Бэмфорд Дж. , Сандеркок П., Деннис М., и др. . Классификация и естественное течение клинически идентифицируемых подтипов инфаркта мозга.Lancet1991; 337: 1521–6.

    15. Янни Б.М. , Мэди С., Артеага Е., и др. . Doenças cardiovasculares observadas durante o seguimento de um grupo de pacientes na forma indeterminada da doença de Chagas. Арк Брас Кардиол, 1998; 71: 21–4.

    16. Бетестти РБ , Росси Массачусетс. Рациональный подход к стратификации риска смертности при болезни сердца Шагаса. Int J Cardiol 1997; 58: 199–209.

    17. Arteaga-Fernandez E , Baretto ACP, Ianni BM, et al . Trombose cardíaca e embolia em pacientes falecidos de cardiopatia chagásica crónica. Арк Брас Кардиол 1989; 52: 189–92.

    18. Barretto AC , Mady C, Ianni BM, et al . Relação entre arritmia ventricular e função cardiaca na doença de Chagas. Arq Bras Cardiol, 1995; 64: 533–5.

    19. Oliveira JSM , Araujo RLC, Navarro MA, и др. .Сердечный тромбоз и тримбоэмболия при хронической болезни сердца Шагаса. Am J Cardiol 1983; 2: 147–51.

    20. Bestetti R . Инсульт в когорте госпитализированных пациентов с хронической болезнью Шагаса. Acta Cardiol 2000; 55: 33–8.

    21. Albanesi-Filho FM , Gomes Filho JB. Тромбоэмболия у пациентов с апикальным поражением, вызванным хронической чагасической кардиопатией. Рев Порт Кардиол, 1991; 10: 35–42.

    22. Mady C , Cardoso RH, Barretto AC, и др. . Выживаемость и предикторы выживаемости у пациентов с застойной сердечной недостаточностью из-за кардиомиопатии Шагаса. Тираж 1994; 90: 3098–102.

    23. Рей RC , Монтеверде DA, Sicca RE. Сердечные источники церебральной эмболии. Arch Neurol1991; 48: 359–60.

  • Ответить

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *